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[细胞增殖] 显微镜下看细胞明显增殖,但是流式检测还是单峰

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发表于 2019-10-8 14:58:07 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
各位老师:
      我分离脾脏淋巴细胞用特异性或非特异性抗原刺激5天后,显微镜下看到个别孔的细胞明显增多,成团状,而且收集细胞离心后也明显看到细胞沉淀增多,但是流式检测就是单峰,包括阳性对照,我用PMA+离子霉素刺激,很明显的增殖,但是和阴性的峰图差不多。这是不是和流式检测时调电压有关的,因为我实验室没有流式仪,去其他实验室做的,感觉操作流式仪的人没做过这个实验,不太会调。

CFSE染色不刺激

CFSE染色不刺激

CFSE染色不刺激

CFSE染色不刺激

PMA+离子霉素

PMA+离子霉素

PMA+离子霉素

PMA+离子霉素

样品

样品

样品

样品
发表于 2019-10-8 21:02:02 | 显示全部楼层
CFSE?
从FSC和SSC分布看,貌似细胞活力不行啊
 楼主| 发表于 2019-10-9 08:08:23 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-10-8 21:02
CFSE?
从FSC和SSC分布看,貌似细胞活力不行啊

老师您好,请问您是怎么看出来细胞活力不行呢?是用0.5uM CFSE染色的,刺激5天,显微镜下看很多团状的细胞,黑色的。
发表于 2019-10-9 15:04:37 | 显示全部楼层
行棋无悔 发表于 2019-10-9 08:08
老师您好,请问您是怎么看出来细胞活力不行呢?是用0.5uM CFSE染色的,刺激5天,显微镜下看很多团状的细 ...

团状,不代表一定是增殖,可能是死了之后粘连的。
黑色不透明的话,往往意味着细胞已经死了。
0.5um按理说应该是可以的,但是可能不同细胞不一样,有没有可能你加的时候没计算正确加多了?
 楼主| 发表于 2019-10-9 15:09:23 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-10-9 15:04
团状,不代表一定是增殖,可能是死了之后粘连的。
黑色不透明的话,往往意味着细胞已经死了。
0.5um按理 ...

哦,这样。请问老师,你觉得我刺激5天时间会不会太长了。缩到3-4天会不会效果好点呢
发表于 2019-10-10 07:55:35 | 显示全部楼层
行棋无悔 发表于 2019-10-9 15:09
哦,这样。请问老师,你觉得我刺激5天时间会不会太长了。缩到3-4天会不会效果好点呢 ...

一个是浓度要算准,第二个时间做个梯度。5天确实太长了。
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