如何设门选出单细胞

jing123

大家好，刚接触流式细胞术有很多不明白的要请教大家。之前实验中设门一直是仪器的维护人员在帮忙弄，拿回数据按照维护人员的方法分析后有人提出第一步选出单细胞横纵坐标选择不正确。工作人员帮我选的是FSC-A—SSC-A，认为不正确的人检验用FSC-A—FSC-H, 但是当我试着用FSC-A—FSC-H分析的时候感觉并不能选取想要的单细胞群落。 所以想来问问大家的意见，希望能帮忙讲解在第一步选择的依据究竟是什么。
细胞用的是胰岛细胞，包括b细胞a细胞等，所以里面应该有很多分泌小泡。

niwanmao

jing123 发表于 2019-10-23 01:16
谢谢倪老师回复，请问拿到flow的数据分析的时候开始应该如何做？先设门选出单细胞，排除黏连体吗？那么横 ...

一般首先用Time横坐标（纵坐标任意，多为FSC-A），圈液流稳定区域。
接着，用FSC-A/FSC-H排除粘连体，但这两个参数排除粘连体在BD仪器上表现完美，在其它机型上表现不尽人意，你也可以考虑用荧光参数的A和H。
最后，用FSC-A/SSC-A排除碎片（本来H比较好，但看你们这个仪器的H压缩的很厉害，所以FSC-H/SSC-H可能效果不好）。

雅世倩仔

你这个是用什么细胞上机的啊

h951595223

分析用FSC-A—SSC-A，FSC-A—FSC-H可以用于排除黏连体

niwanmao

A/H用于设单细胞门，排除粘连体。FSC/SSC，这不是排除粘连体，而是排除碎片。

jing123

雅世倩仔 发表于 2019-10-15 10:04
你这个是用什么细胞上机的啊

用的是Beckman的CytoFlex

jing123

h951595223 发表于 2019-10-15 11:45
分析用FSC-A—SSC-A，FSC-A—FSC-H可以用于排除黏连体

感谢回复，所以一般是现用FSC-A—SSC-A来筛选单细胞，然后用FSC-A—FSC-H来排除黏连体吗？

jing123

niwanmao 发表于 2019-10-15 22:09
A/H用于设单细胞门，排除粘连体。FSC/SSC，这不是排除粘连体，而是排除碎片。
...

谢谢倪老师回复，请问拿到flow的数据分析的时候开始应该如何做？先设门选出单细胞，排除黏连体吗？那么横纵坐标选择什么呢？
在我的数据分析中，FSC/SSC的设置是错误的吗？是不是没有排除单细胞？

harryqshepherd

niwanmao 发表于 2019-10-15 04:28
一般首先用Time横坐标（纵坐标任意，多为FSC-A），圈液流稳定区域。
接着，用FSC-A/FSC-H排除粘连体，但 ...

倪老师，我想请教一下。A、H、W这三个参数来排除粘连体和排除碎片有什么标准吗？我看到不同的文献中，有人用不同方式来排除，比如用SSC-H/SSC-W和FSC-H/FSC-W。所以，针对不同的样本，在排除粘连体和碎片的这两者方面，我们该如何选择参数？

niwanmao

harryqshepherd 发表于 2021-1-25 14:43
倪老师，我想请教一下。A、H、W这三个参数来排除粘连体和排除碎片有什么标准吗？我看到不同的文献中，有 ...

标准就是对角线。
至于用什么组合来排除，FSC和SSC的A、H、W均可，不同机器的表现不同，所以可能选择上会有所不同。