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[淋巴细胞相关] 小鼠脾脏Tregs检测

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发表于 2019-10-17 23:17:57 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
请问有经验的做过Tregs的老师:
我的样本小鼠脾脏细胞
做CD45 CD4 CD25 FoxP3染色,数据分析时,实验组与对照组都是全染,补偿也调好的情况下,出现了一个十分奇怪的现象:
其他抗原的荧光强度对照组和实验组没有差异,但是在CD4下面的 (CD25-PE-FoxP3-BV421)双参数图中实验组不管阴性群还是阳性群,整体应该向上及右移动,Why?
一直想不通,请问老师可能的原因是什么,我制备样本及上机操作和分析,我认为均没有问题,都是一起操作的。
如附件图
请大家帮忙看看,谢谢


对照组

对照组

实验组

实验组
发表于 2019-10-18 08:03:27 | 显示全部楼层
建议换到BD的机器上再对比一下。
 楼主| 发表于 2019-10-18 11:13:08 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-10-18 08:03
建议换到BD的机器上再对比一下。

看了,分析出来都差不多,这可能是什么原因呢
发表于 2019-10-18 12:41:29 | 显示全部楼层
Veblen 发表于 2019-10-18 11:13
看了,分析出来都差不多,这可能是什么原因呢

应该是破膜剂的问题。
 楼主| 发表于 2019-10-19 10:33:49 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-10-18 12:41
应该是破膜剂的问题。

谢谢倪老师,我不是特别清楚可能为啥,因为两个样本一起操作的,也都是破膜,染色也一模一样。
发表于 2019-10-19 15:36:45 | 显示全部楼层
Veblen 发表于 2019-10-19 10:33
谢谢倪老师,我不是特别清楚可能为啥,因为两个样本一起操作的,也都是破膜,染色也一模一样。 ...

不是说你操作不好,而是破膜剂效果不好。
 楼主| 发表于 2019-10-20 16:11:00 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-10-19 15:36
不是说你操作不好,而是破膜剂效果不好。

老师,有个地方可能是我表达得不够精确,我的实验组都是破膜染了CD25和Foxp3的,另外,对照组是未破膜,染色除CD25和Foxp3以外的所有marker;
想问一下,实验组相对于对照组在CD25-Foxp3的双参数图种,整体往右上方向偏移,我个人认为是破膜剂的问题,但具体原因可能是什么呢?
发表于 2019-10-20 20:53:25 | 显示全部楼层
Veblen 发表于 2019-10-20 16:11
老师,有个地方可能是我表达得不够精确,我的实验组都是破膜染了CD25和Foxp3的,另外,对照组是未破膜, ...

我的意思是,你的破膜剂没破进去,所以只能造成一些非特异性的偏移,而无特异性荧光信号出来。
 楼主| 发表于 2019-10-22 11:58:49 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-10-20 20:53
我的意思是,你的破膜剂没破进去,所以只能造成一些非特异性的偏移,而无特异性荧光信号出来。 ...

got it, thank Mr. Ni.
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