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[凋亡检测] 为什么出现对角线无法去除

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发表于 2019-10-25 15:29:49 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
如题,请问各位老师对于这种对角线的干扰有什么合理的解释呢?一般都没有出现这么明显的问题,样本为NK细胞,使用喜树碱处理,浓度逐渐增大,谢谢。
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倪老师,我个人的一点经验。他这个图我认为补偿调的差不多了。造成这样的原因可能是他的药可以发荧光。我们实验室有个课题组他们的药在高浓度的时候用FITC/PI做凋亡的图比这个还严重,整个全是45度角上去。完全分不开。后来降低药物浓度和换APC/7-AAD就可以了
发表于 2019-10-25 15:29:50 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-10-28 13:40
首先调节正确补偿,在补偿调节到位的情况下,对角线信号才考虑为不好。
你这个图上,我看不出补偿有没有 ...

倪老师,我个人的一点经验。他这个图我认为补偿调的差不多了。造成这样的原因可能是他的药可以发荧光。我们实验室有个课题组他们的药在高浓度的时候用FITC/PI做凋亡的图比这个还严重,整个全是45度角上去。完全分不开。后来降低药物浓度和换APC/7-AAD就可以了
发表于 2019-10-27 19:50:43 | 显示全部楼层
调节一下FITC-PI的补偿
发表于 2019-10-28 09:31:38 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-10-27 19:50
调节一下FITC-PI的补偿

倪老师,凋亡流式实验中对角线的不是表示死细胞吗,调节荧光补偿有用吗?
发表于 2019-10-28 13:40:58 | 显示全部楼层
haoxu 发表于 2019-10-28 09:31
倪老师,凋亡流式实验中对角线的不是表示死细胞吗,调节荧光补偿有用吗? ...

首先调节正确补偿,在补偿调节到位的情况下,对角线信号才考虑为不好。
你这个图上,我看不出补偿有没有调到位,感觉应该是没调。
发表于 2019-10-29 13:51:21 | 显示全部楼层
haoxu 发表于 2019-10-28 09:31
倪老师,凋亡流式实验中对角线的不是表示死细胞吗,调节荧光补偿有用吗? ...

这个明显补偿没调好
发表于 2019-10-30 07:51:48 | 显示全部楼层
hwthwt 发表于 2019-10-30 07:42
倪老师,我个人的一点经验。他这个图我认为补偿调的差不多了。造成这样的原因可能是他的药可以发荧光。我 ...

如果只看第一管,像。
但是结合后面几管,就不像。
楼主一直没反馈其FITC-PI的补偿是多少,所以无法确定,但我更倾向于是补偿。
发表于 2019-10-30 10:09:54 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-10-30 07:51
如果只看第一管,像。
但是结合后面几管,就不像。
楼主一直没反馈其FITC-PI的补偿是多少,所以无法确定 ...

喜树碱淡黄色,确实有荧光,高浓度下影响PI和FITC,6楼说的有道理。我们做的许多植物提取物都存在这种现象。可通过加大PI浓度、增加补偿或调换荧光标记物来解决。
 楼主| 发表于 2019-11-6 15:34:11 | 显示全部楼层
非常感谢倪老师的回复以及各位大神的回复,我的初始荧光补偿是FITC-PI=7%,但是几乎没有变化,增加到180%才会成竖直状,所以基本上是自发荧光或者是药物的荧光问题,再次感谢各位。
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