怎么刺激PBMC表达4-1BB?

兰兰p

怎么刺激PBMC表达4-1BB?

niwanmao

要刺激外周血单个核细胞（PBMC）表达 4-1BB（又称 CD137），可以按照以下一般步骤进行：
1. 使用密度梯度离心法（如 Ficoll-Paque）从全血中分离 PBMC。PBMC 由各种免疫细胞类型组成，包括 T 细胞、B 细胞和单核细胞。
2. 使用适当的刺激激活 PBMC，例如
a. 有丝分裂原： 诱导淋巴细胞非特异性活化和增殖的物质，如植物血凝素（PHA）或ConA。
b. 抗 CD3 的抗体（抗 CD3）： 这些抗体与 T 细胞上的 CD3 受体复合物结合，提供激活信号。
c. 12 肉豆蔻酸磷脂 13-乙酸酯（PMA）和离子霉素： PMA 是一种蛋白激酶 C 激活剂，而离子霉素是一种钙离子诱导剂。它们很像 T 细胞活化所需的信号。


3. 4-1BB 的最佳表达可能需要协同刺激信号。这些信号可通过以下方式提供
a. 抗 CD28 抗体： CD28 是 T 细胞上的共刺激分子，用抗体与之结合可增强活化和 4-1BB 的表达。
b. 细胞因子： 某些细胞因子，如白细胞介素-2（IL-2）或白细胞介素-15（IL-15），可促进 4-1BB 的表达。

4. 根据刺激和所需的 4-1BB 表达水平，将活化的 PBMC 培养适当的时间，通常为 24 至 72 小时。

5. 使用流式细胞仪分析 PBMC 上 4-1BB 的表达。用荧光标记的 4-1BB 特异性抗体（抗-CD137）染色细胞，并用流式细胞仪分析染色细胞。

请注意，4-1BB 表达的最佳条件可能因具体的实验设置和所需结果而异。此外，PBMC 群体中的不同细胞类型在受到刺激后可能会表现出不同的 4-1BB 表达水平。均需要做预试验进行摸索。




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4、流式分选和磁珠分选

兰兰p

niwanmao 发表于 2024-4-10 10:01
要刺激外周血单个核细胞（PBMC）表达 4-1BB（又称 CD137），可以按照以下一般步骤进行：
1. 使用密度梯度离 ...

太棒了，感谢倪老师的解答，可以转一些激活的具体方法吗？比如激活试剂使用量在什么范围更合适？

兰兰p

兰兰p 发表于 2024-4-16 14:46
太棒了，感谢倪老师的解答，可以转一些激活的具体方法吗？比如激活试剂使用量在什么范围更合适？ ...

谢谢倪老师，最近有同事摸索了条件用ACRO的CD3和CD28抗体1~9ug/ml共刺激24h，已有很好激活，能达50%