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标题: 大鼠TH17不同对照下的设门结果 [打印本页]

作者: 以梦为x马 时间: 2015-2-6 19:50
标题: 大鼠TH17不同对照下的设门结果
来源相同，处理相同，唯一不同就是，空白对照CD4/IL-17-PE都没加，同型对照加CD4和PE同型，样品加CD4/IL-17-PE，但是发现空白对照和同型对照竟然细胞也不一样，不知如何解释？这个TH17该如何设门？感觉好少

作者: livan724 时间: 2015-2-6 20:57
觉得加CD4的抗体和PE的同型做对照好点

作者: 以梦为x马 时间: 2015-2-6 20:59
设门肯定是根据同型对照设门，最主要是设多高？{:soso_e113:}

作者: livan724 时间: 2015-2-6 21:19
我是说你做的同型可以不加CD4的同型，而是CD4的抗体和PE的同型弄在一管来做对照

作者: livan724 时间: 2015-2-6 21:21
是我看错了，不好意思！标多个CD3看看会不会好点？

作者: niwanmao 时间: 2015-2-6 21:37
IL-17分群还是可以的，象C2那样就可以。另外，都看不懂你到底哪个是空白对照，你不是说空白对照什么都没加吗？

作者: 以梦为x马 时间: 2015-2-7 08:38
@niwanmao 老师不好意思，写错了，空白是加了CD4，没加IL-17

作者: 以梦为x马 时间: 2015-2-7 08:40

livan724 发表于 2015-2-6 21:21
是我看错了，不好意思！标多个CD3看看会不会好点？

也有考虑过，但是之前倪老师曾说过，加了CD4可以不加CD3，因为CD4本身就是CD3的亚群。

作者: 以梦为x马 时间: 2015-2-7 08:46

niwanmao 发表于 2015-2-6 21:37
IL-17分群还是可以的，象C2那样就可以。另外，都看不懂你到底哪个是空白对照，你不是说空白对照什么都没加 ...

这三管都是加了CD4，然后IL-17分别是没加，加了PE同型，加了IL-17-PE，但是细胞荧光强度发现了逐渐增强的现象，整个细胞群分布都往上移动，这可以说明非特异性染色其实还是很高的，老师，可以这么解释吗？

作者: 以梦为x马 时间: 2015-2-7 08:50

niwanmao 发表于 2015-2-6 21:37
IL-17分群还是可以的，象C2那样就可以。另外，都看不懂你到底哪个是空白对照，你不是说空白对照什么都没加 ...

如果C2群算是IL-17阳性群，那C1群，如何解释呢？关于这一点我真实无法自圆其说，所以这化门化的整个人都醉了

作者: niwanmao 时间: 2015-2-7 10:17

以梦为x马发表于 2015-2-7 08:40
也有考虑过，但是之前倪老师曾说过，加了CD4可以不加CD3，因为CD4本身就是CD3的亚群。 ...

分群跟加不加CD3倒是没有关系。严格一点，加CD3最好，因为单核细胞也会弱表达CD4。

作者: niwanmao 时间: 2015-2-7 10:19

以梦为x马发表于 2015-2-7 08:46
这三管都是加了CD4，然后IL-17分别是没加，加了PE同型，加了IL-17-PE，但是细胞荧光强度发现了逐渐增强的 ...

只加CD4那管所谓的空白管肯定不能用来设门，这是肯定的，因为它反映不了背景荧光。
加PE同型的那管，你需要确保这个同型是否与你购买的IL-17 为同一家公司生产，同一个亚类？如果不是，也不能作为正确的设门参考。

作者: niwanmao 时间: 2015-2-7 10:20

以梦为x马发表于 2015-2-7 08:50
如果C2群算是IL-17阳性群，那C1群，如何解释呢？关于这一点我真实无法自圆其说，所以这化门化的整个人都 ...

C1算背景荧光，说明背景荧光还是偏强。这是避免不了的，这不是你的问题，也不单单是抗体的问题，还包括仪器电子电路的问题。

作者: 以梦为x马 时间: 2015-2-7 11:37

niwanmao 发表于 2015-2-7 10:19
只加CD4那管所谓的空白管肯定不能用来设门，这是肯定的，因为它反映不了背景荧光。
加PE同型的那管，你 ...

同型抗体与IL17-PE抗体的公司，抗体品种亚型都是一样的，这个根据同型对照画门，感觉线会偏低一些，有可能导致人为把阴性细胞群分为两群，所以我后来（之前上传的同型对照2设门那张图）设门还是调高了一些，不知这样做可否？

作者: 以梦为x马 时间: 2015-2-7 11:39

niwanmao 发表于 2015-2-7 10:20
C1算背景荧光，说明背景荧光还是偏强。这是避免不了的，这不是你的问题，也不单单是抗体的问题，还包括仪 ...

倪老师，如果C1算背景荧光，那C2是否也可以说是背景荧光呢？我感觉这th17分群算有吗？

作者: niwanmao 时间: 2015-2-8 14:41

以梦为x马发表于 2015-2-7 11:39
倪老师，如果C1算背景荧光，那C2是否也可以说是背景荧光呢？我感觉这th17分群算有吗？ ...

所谓背景荧光，来源非常多，这里有过相关介绍：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4181-1-1.html

简而言之，没有标记抗体时在阳性区域出现的都算背景。Th17我记得分群还可以的，但是你的实验结果我没看到样本组

作者: 以梦为x马 时间: 2015-2-8 22:04

niwanmao 发表于 2015-2-8 14:41
所谓背景荧光，来源非常多，这里有过相关介绍：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4181-1-1.html

简而 ...

谢谢老师您的回复，我看了一下老师您推荐的帖子，我觉得我的背景高主要还是因为抗体的非特异性结合多导致的，我的样品组就是之前上传的第3、5、7张图片，是同一个流式结果，只是不同的设门方式。

作者: 弥勒 时间: 2017-3-15 13:42
楼主，您好，您的大鼠Th17用全血还是脾脏做的呢？我用全血怎么都做不出来，您的刺激方法是什么呢？

作者: niwanmao 时间: 2017-3-16 08:05

弥勒发表于 2017-3-15 13:42
楼主，您好，您的大鼠Th17用全血还是脾脏做的呢？我用全血怎么都做不出来，您的刺激方法是什么呢？ ...

破膜、抗体等因素都需要考虑。对于人，正常情况下Th17也不会太少，而大鼠，我觉得正常情况下也应该会有。

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