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标题: FMO对照和同型对照，你用对了吗？ [打印本页]

作者: niwanmao 时间: 2015-5-8 16:39
标题: FMO对照和同型对照，你用对了吗？
昨天的帖子中（http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4404-1-1.html）提到了，同型对照主要是反映抗体的非特异性结合背景，并且介绍了同型对照选择的几个关键因素，同时也顺便提及FMO对照。FMO对照主要用在>4色的流式检测中，由所有抗体减去一个目标抗体组成，所以能够反映荧光渗漏引起的背景荧光，在多色流式检测中非常重要。
从以上概念我们可以看出，FMO对照和同型对照反映的是两种类型的背景荧光，所以在多色流式时，要用单独使用其中一种来设门，均不可靠。

此外，对于对照，大家问的最多的问题就是我是不是要在每次检测时都要用FMO和同型对照，这个问题的答案就是，如果资金足够，最好都用，但对于大多数情况下，标本批间差异不大时，可以只做一次。

作者: 钢蛋儿 时间: 2015-5-18 00:09
学习啦~~~

作者: zj8237277 时间: 2017-8-9 00:15
倪老师，您好！
FMO对照和同型对照反映的是两种类型的背景荧光，所以在多色流式时，要用单独使用其中一种来设门，均不可靠。
请问下，那我到底是选用哪个对照来设门呢（除生物学对照）？谢谢！

作者: niwanmao 时间: 2017-8-9 02:38

zj8237277 发表于 2017-8-9 00:15
倪老师，您好！
FMO对照和同型对照反映的是两种类型的背景荧光，所以在多色流式时，要用单独使用其中一种来 ...

生物学阴性对照最佳，其次是FMO＋Fc Blocking。同型对照在多色实验中，用了Fc Blocking之后就几乎没什么意义了。

作者: zj8237277 时间: 2017-8-9 10:09
好的，谢谢倪老师！

作者: lgfffancy 时间: 2017-10-9 00:04
学习学习

作者: 小外星人 时间: 2018-12-31 06:26
非常好，解惑了！！

作者: luorenbu 时间: 2019-3-1 23:03

niwanmao 发表于 2017-8-9 02:38
生物学阴性对照最佳，其次是FMO＋Fc Blocking。同型对照在多色实验中，用了Fc Blocking之后就几乎没什么 ...

倪老师您好，
为什么同型对照在用了FC block的多样品染色后意义不大？

作者: niwanmao 时间: 2019-3-2 15:15

luorenbu 发表于 2019-3-1 23:03
倪老师您好，
为什么同型对照在用了FC block的多样品染色后意义不大？

两者作用是一样的。同型对照是为了让我们了解由于Fc受体非特异性结合引起的背景荧光（当前，前提是同型对照挑对了，详细可搜索“同型对照”关键词），那么Fc受体阻断之后，你觉得同型对照还有必要用吗？

作者: hellohello 时间: 2020-4-14 19:46
老师您好，在这种情况下，由于实验条件限制没办法做生物学阴性对照实验，请问该如何画门？谢谢

作者: niwanmao 时间: 2020-4-14 20:58

hellohello 发表于 2020-4-14 19:46
老师您好，在这种情况下，由于实验条件限制没办法做生物学阴性对照实验，请问该如何画门？谢谢 ...

没有生物学阴性对照的情况确实不少，此时，就只能：
1、如果邻近通道有荧光渗漏，则Fc阻断后做FMO+同型对照，以此设门。
2、如果单色或无荧光渗漏，则做Fc阻断后，染同型对照。
只能如此。

作者: hellohello 时间: 2020-4-15 09:57

niwanmao 发表于 2020-4-14 20:58
没有生物学阴性对照的情况确实不少，此时，就只能：
1、如果邻近通道有荧光渗漏，则Fc阻断后做FMO+同型对 ...

老师，想问一下，你说的“Fc阻断后做FMO+同型对照”，是指做PE的FMO管的时候在此管里加上其他荧光的抗体和PE对应的同型抗体，然后再做一管同型对照，两管结合来看。还是说做PE的FMO管的时候在此管里加上其他荧光的抗体及同型抗体、PE对应的同型抗体，然后再做一管同型对照，两管结合来看。请问是哪一种制备方法？谢谢

作者: niwanmao 时间: 2020-4-15 16:16

hellohello 发表于 2020-4-15 09:57
老师，想问一下，你说的“Fc阻断后做FMO+同型对照”，是指做PE的FMO管的时候在此管里加上其他荧光的抗体 ...

例如A、B、C、D、E五个抗体的方案，要检测B的表达率。

管1： Fc阻断后，加A、C、D、E+ B的同型对照
管2 ：Fc阻断后，加A、C、D、E、B
按照管1设门。

作者: hellohello 时间: 2020-4-15 21:30

niwanmao 发表于 2020-4-15 16:16
例如A、B、C、D、E五个抗体的方案，要检测B的表达率。

管1： Fc阻断后，加A、C、D、E+ B的同型对照

明白了，谢谢老师～

作者: 小卡的口哨 时间: 2021-1-6 14:40
倪老师：请问设了生物学对照还需要用FC block么，我是检测PBMC中的αβ T细胞，但PBMC里面还有单核等细胞，这些会不会导致假阳性呢？

作者: zyn90813 时间: 2021-4-25 17:46

niwanmao 发表于 2020-4-14 20:58
没有生物学阴性对照的情况确实不少，此时，就只能：
1、如果邻近通道有荧光渗漏，则Fc阻断后做FMO+同型对 ...

倪老师，您在之前的回复中提到Fc Blocking和同型对照不能一起做，但是您这里的回复写的是一起做，该怎么理解呢？

作者: 闷油瓶 时间: 2021-6-15 08:21

niwanmao 发表于 2020-4-15 16:16
例如A、B、C、D、E五个抗体的方案，要检测B的表达率。

管1： Fc阻断后，加A、C、D、E+ B的同型对照

用FMO对照的话，就不用调补偿了呗？

作者: shiyisyl 时间: 2022-4-16 11:38

hellohello 发表于 2020-4-14 19:46
老师您好，在这种情况下，由于实验条件限制没办法做生物学阴性对照实验，请问该如何画门？谢谢 ...

是不是加速FMO对照，就可以设门了，毕竟优先unstain，其次FMO

作者: wmj123456 时间: 2023-1-6 19:17
倪老师，如果是做的两色流式实验，在进行设门的时候，是否也可以用FMO作为设门对照？

作者: tangxun 时间: 2024-12-3 16:03
倪老师，同型对照信号会比真实偏高这个问题多年来一直遇到，您知道啥原因吗？

作者: niwanmao 时间: 2024-12-3 19:45

tangxun 发表于 2024-12-3 16:03
倪老师，同型对照信号会比真实偏高这个问题多年来一直遇到，您知道啥原因吗？

...

同型对照与实验抗体不匹配

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