流式中文网

标题: 分出的单细胞或者细菌成活率如何？如何提高成活率？ [打印本页]

作者: huananlou101 时间: 2016-8-28 21:41
标题: 分出的单细胞或者细菌成活率如何？如何提高成活率？
我在分选酵母，然后每次分选出来的酵母成活率都不一致。有时候长得很多，有时候长得很少。我用的是96孔板，是不是可以考虑换更小体积的板？大家做哺乳动物细胞的时候，单细胞成活率如何？体积会影响成活率么？

作者: niwanmao 时间: 2016-8-28 21:41
只要能长，我觉得也不错了。分选后的细胞如果分选时培养基条件好，分选前的细胞状态好，应该是成活率很高的，Purdue上有人说100％：

By PCR, I am able to hit >95% of the wells. For individual cell lines it can vary. I have seen as much as >90% with a robust cell type. Currently with a Neural Stem Cell line they are happy with 30%. The sorter is doing its job if setup correctly. The problem occurs during culture. Some cells are damaged and do not “turn” back on for several days. Some just do not like being a single cell. Conditioned media seems to help. I would like as an operator to ensure 100% growth in each well. I do have to realize that after they leave my sorter it is up to the investigator. I also like to add a row of more than 1 cell per well. Sometimes a row of 5 and 10 per well will give good QC results. If they get no growth from the 10/well then culture conditions need to be addressed.

Jim

作者: huananlou101 时间: 2016-8-29 09:57

niwanmao 发表于 2016-8-28 21:41
只要能长，我觉得也不错了。分选后的细胞如果分选时培养基条件好，分选前的细胞状态好，应该是成活率很高的 ...

师兄~你见过小天使长什么样子么？~那快去照照镜子看一下~~~

作者: niwanmao 时间: 2016-8-29 10:07

huananlou101 发表于 2016-8-29 09:57
师兄~你见过小天使长什么样子么？~那快去照照镜子看一下~~~

这话什么意思？？？？

作者: huananlou101 时间: 2016-8-29 10:41

niwanmao 发表于 2016-8-29 10:07
这话什么意思？？？？

夸奖~~~说你跟小天使似得~帮助别人~~~对了师兄~流式图中的HIS%有什么意义么。。。

作者: niwanmao 时间: 2016-8-29 11:10

huananlou101 发表于 2016-8-29 10:41
夸奖~~~说你跟小天使似得~帮助别人~~~对了师兄~流式图中的HIS%有什么意义么。。。 ...

放个图上来看看，没见过这种标识。

作者: huananlou101 时间: 2016-8-30 15:59

niwanmao 发表于 2016-8-29 11:10
放个图上来看看，没见过这种标识。

%Hist.我打错了。。。。图片在公共电脑里不好打出来

作者: niwanmao 时间: 2016-8-30 16:29

huananlou101 发表于 2016-8-30 15:59
%Hist.我打错了。。。。图片在公共电脑里不好打出来

是什么分析软件里的？是不是直方图的百分比？

作者: huananlou101 时间: 2016-8-30 18:34
本帖最后由 huananlou101 于 2016-8-30 18:35 编辑

niwanmao 发表于 2016-8-30 16:29
是什么分析软件里的？是不是直方图的百分比？

我去截个图。。%Hist

作者: niwanmao 时间: 2016-8-30 19:07

huananlou101 发表于 2016-8-30 18:34
我去截个图。。%Hist

哦，是Summit软件里面的，这里的Hist指的是门内细胞占上级门的比例。

作者: huananlou101 时间: 2016-8-31 15:19

niwanmao 发表于 2016-8-30 19:07
哦，是Summit软件里面的，这里的Hist指的是门内细胞占上级门的比例。

倪老师，在summit 软件里在FL1log 的情况下，是不是mean代表的就的就是荧光强度，单位是多少？我上图图二的状态下mean 是不是荧光强度。

作者: niwanmao 时间: 2016-8-31 15:41

huananlou101 发表于 2016-8-31 15:19
倪老师，在summit 软件里在FL1log 的情况下，是不是mean代表的就的就是荧光强度，单位是多少？我上图图二 ...

荧光强度没有单位。

作者: huananlou101 时间: 2016-8-31 20:19

niwanmao 发表于 2016-8-31 15:41
荧光强度没有单位。

那怎么对比大小？看数值？？？

作者: niwanmao 时间: 2016-8-31 20:26

huananlou101 发表于 2016-8-31 20:19
那怎么对比大小？看数值？？？

是的。如果你要做高级点，希望得到ABC，那么建议参考：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3342-1-1.html

作者: huananlou101 时间: 2016-8-31 21:22

niwanmao 发表于 2016-8-31 20:26
是的。如果你要做高级点，希望得到ABC，那么建议参考：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3342-1-1.html ...

谢谢~~~鞠躬

作者: huananlou101 时间: 2016-8-31 21:29
老师，我看社区里面的资料，分选的液滴大小是可以根据液流速度，液滴震荡频率来调整的。大概怎么换算的，没有看见详细的信息。您有资源么？

作者: huananlou101 时间: 2016-8-31 22:29
本帖最后由 huananlou101 于 2016-8-31 22:33 编辑

huananlou101 发表于 2016-8-31 21:22
谢谢~~~鞠躬

老师，流式分选出单个细胞是不是符合泊松分布？数学名词不是很懂，您知道怎么计算么~

欢迎光临流式中文网 (https://flowcyto.cn/bbs/)