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标题: 如何减少样本中的粘连体？ [打印本页]

作者: niwanmao 时间: 2019-9-19 12:16
标题: 如何减少样本中的粘连体？
粘连体的概念，以及如何在分析时排除粘连体，我们在既往做过总结：

但是，如果粘连体太多，即使我们排除掉，对实验结果影响还是很大的，而且对仪器管路也不利。所以，预防粘连体，才是上上之策。这里概括一些细胞粘连的常见原因和对策，希望给大家的实验样本制备带来帮助。

为什么单细胞如此重要？

粘连体不能用于分析或分选，因为无法确定每个荧光标记的真实状态。粘连体的存在意味着可用于分析或分选的细胞更少了。
粘连体会导致通过仪器的流动不稳定，导致荧光强度测量异常。
较大粘连体可能会堵塞仪器。
仪器中粘连体越多，越容易导致样本获取速度变慢，使获取时间延长。

粘连的常见原因和对策需要根据粘连的原因，采取相应的对策。
1、由细胞间粘附造成的这种原因通常依赖于阳离子，所以可以采取以下方法应对：

收获贴壁细胞时，用大豆胰蛋白酶抑制剂（Soybean Trypsin Inhibitor）代替培养基/血清淬灭胰蛋白酶。
使用不含二价阳离子的缓冲液（不含钙，不含镁）。
尝试使用BSA代替血清作为缓冲液的蛋白质成分。然而，并非所有细胞都能与BSA兼容，因此在开始大型实验之前需事先测试一下。
如果细胞不兼容BSA，请使用已除去钙和镁的透析血清。
向样品中加入EDTA（1-5mM）。但并非所有细胞都能耐受EDTA，因此在开始大型实验之前需事先测试此方法。

2、由细胞死亡引起的这种原因通常是因为裂解细胞释放的DNA，粘稠的DNA使得细胞更容易粘连。因此对策如下：

用含100μg/mL DNAse I、5mM MgCl2的HBSS溶液处理细胞，室温15-30分钟。
用含5mM MgCl2的HBSS洗涤细胞一次。
将细胞重悬于含有1-5mM MgCl2和25-50ug/mL DNAse I的HBSS中。

参考文献：
https://www.bdbiosciences.com/do ... ng_TechBulletin.pdf
http://www.rockefeller.edu/fcrc/tips/sampleprep
http://expertcytometry.com/how-c ... sorting-experiment/

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