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标题: 体外脾细胞诱导分化th17，treg [打印本页]

作者: sunqice 时间: 2019-11-12 13:46
标题: 体外脾细胞诱导分化th17，treg
各位大牛，我做体外脾细胞诱导分化th17，treg，一直做不好，跪求帮助。现有几个问题：1.cd3/cd28孵板，建议多少浓度，加多少量呢，我用的96孔板；2.th17,treg建议培养几天呢，2天后要300g，5min离心细胞，再加新鲜培养基和各刺激因子，换新的孔板吗。3.各刺激因子建议怎么加呢，我用96孔板，10*6细胞数，每孔加200ul细胞，treg加cd28 2ug/ml，tgf-beita 5ul/m，il-2 20ng/ml。th17 2ug/ml，tgf-beita 5ng/ml，il-6 20ng/ml，ifn-gama 10ug/ml，il-4 10ug/ml，treg我只诱导出2%，不知道哪里出问题了。跪求帮助！

作者: niwanmao 时间: 2019-11-12 14:20
这个帖子看了没有？小鼠脾脏、淋巴结组织体外诱导分化Th1/Th2/iTreg/Th17详细步骤

作者: sunqice 时间: 2019-11-12 17:20
倪老师，按照这个帖子的方法做了，还是做不出来。。这个帖子cd3/cd28孵板浓度及量没有提到，具体加多少啊，就以上这些问题是我考虑可能存在的问题

作者: niwanmao 时间: 2019-11-13 08:04

sunqice 发表于 2019-11-12 17:20
倪老师，按照这个帖子的方法做了，还是做不出来。。这个帖子cd3/cd28孵板浓度及量没有提到，具体加多少啊， ...

这个板子有现成卖的，建议卖商品化的

作者: sunqice 时间: 2019-11-13 10:34
倪老师，是否买cd62L，treg能诱导出更多

作者: sunqice 时间: 2019-11-13 14:06
倪老师，你是用美天旎初始CD4分选试剂盒吗，哪里购买含CD62L，CD44，CD25，CD4荧光抗体混合物？求推荐

作者: niwanmao 时间: 2019-11-13 14:13

sunqice 发表于 2019-11-13 10:34
倪老师，是否买cd62L，treg能诱导出更多

CD62L是检测用的

作者: sunqice 时间: 2019-11-13 14:34
分选试剂盒那里看不懂，哪里购买含CD62L，CD44，CD25，CD4荧光抗体混合物，是什么分选试剂盒呢

作者: sunqice 时间: 2019-11-13 15:04
倪老师，CD4分选试剂盒那里看不懂，哪里购买含CD62L，CD44，CD25，CD4荧光抗体混合物，是什么分选试剂盒呢。分选完需要荧光鉴定吗？跪求

作者: niwanmao 时间: 2019-11-13 17:50

sunqice 发表于 2019-11-13 15:04
倪老师，CD4分选试剂盒那里看不懂，哪里购买含CD62L，CD44，CD25，CD4荧光抗体混合物，是什么分选试剂盒呢 ...

流式分选用的。
分选那一步如果没有条件，你改用磁珠分出CD4+T细胞吧。

作者: sunqice 时间: 2019-11-15 22:03
倪老师，cd4➕t细胞，初试cd4➕t细胞，cd4➕cd25磁珠（分选cd4➕cd25-），cd4➕cd62l，cd4➕cd25➕foxp3➕分选试剂盒，这4˙种试剂盒，建议购买美天霓哪种试剂盒，再加刺激因子，分选初treg，th17呢。。或者你买的哪种试剂盒，求推荐

作者: niwanmao 时间: 2019-11-17 09:51

sunqice 发表于 2019-11-15 22:03
倪老师，cd4➕t细胞，初试cd4➕t细胞，cd4➕cd25磁珠（分选cd4➕cd25-），cd4➕cd62l，cd4➕cd25➕foxp3➕ ...

初始CD4+T吧。

作者: sunqice 时间: 2019-11-18 09:52
初始cd4➕t细胞即cd4➕cd25-cd62➕cd44-咯，跟cd4➕cd62l试剂盒区别就是后者更纯，是吗？我们只要买的试剂盒确定能分选出一定比例treg，th7就行

作者: sunqice 时间: 2019-11-18 11:22
倪老师，我买了美天妮的初始cd4➕t细胞分选试剂盒，说明书提到需要5种荧光抗体鉴定，想问是否一定需要鉴定以及是否都要买全，还是可以挑cd4和cd62l也可以，谢谢

作者: niwanmao 时间: 2019-11-18 20:30

sunqice 发表于 2019-11-18 11:22
倪老师，我买了美天妮的初始cd4➕t细胞分选试剂盒，说明书提到需要5种荧光抗体鉴定，想问是否一定需要鉴定 ...

最好按说明书推荐的做比较好。

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