T细胞CD44和CD62L染色

niwanmao

想问几个问题：
一共70多万个细胞，你的染色体积是多少？抗体用量是多少？各个抗体的克隆号是什么？

niwanmao

zhouby701 发表于 2013-8-17 15:59

                               
登录/注册后可看大图

100ul染色体积，细胞量为2×10e6，抗体均为BD公司产品，Percp-cy5.5 Rat anti-mouse CD44,克隆号是：IM7 ...

从图形上看，CD3阳性群分不开，CD8虽然分开了，但S/N比不高。所以我在担心你所用的其它抗体量可能亦存在不足。从CD62L的图看，这些细胞可能是CD62L假阴性，就是说，可能你减少细胞量至1×10E6或5×10E5，染色体积减少到50ul，CD62L的荧光就会得到大大提高。

niwanmao

zhouby701 发表于 2013-08-21 10:55:06

                               
登录/注册后可看大图

谢谢老师的指导，您的意思是我们的抗体加的少了，染色的体系又有点大吗？我们这个要检测的组合总共有7个m

2ul应该还好加的啊，我们平时经常加2ul的量，关键还是手法。还是不要稀释，染色体积减少到50ul试试

niwanmao

zhouby701 发表于 2013-8-21 16:10

                               
登录/注册后可看大图

最主要是我们每次做流式用的抗体种类比较多，有些抗体加的量都不一样，有的不到1微升/test。我看到别的同 ...

抗体的稀释液有专门的配方，你如果随意用PBS稀释我担心效果没法保证。现在1ul、2ul加样都不是问题，关键还是操作的手法上。
50ul里面还是要有1×10E6细胞的

niwanmao

行棋无悔 发表于 2019-7-25 11:42
老师您好！请问染色体积用50ul是不是比100ul的效果好，尤其是对胞内染色。我一直比较困惑这个问题 ...

不是越小越好，而是要根据抗体适当的浓度（最佳浓度）

niwanmao

苏沁沁 发表于 2019-7-29 08:48
倪老师、染色为什么也和体积有关呢、抗体加足量的话、体积大点不可以吗 ...

之所以与体积有关，是因为浓度，浓度＝抗体量/溶液体积，在抗体量固定的时候，体积保持恒定，方能使抗体浓度保持恒定，染色体系才能稳定。滴定就是确定最佳浓度。