关于单核细胞negative selection of monocytes from PBMC by MACS的问题

niwanmao

第1个问题是关于MACS分选的，需要@gcz5340 @olivezhou0716  等高手来看看。
第2个问题：Q3可能是残留的淋巴细胞和细胞碎片
第3个问题：PI应该是上机前加的，PFA固定应该不会有影响。
第4个问题：一般冻存过的细胞基本上都会有死细胞或碎片存在，无法避免，但可以通过改善冻存液成份、改善冻存步骤等方式。具体需要根据你的细胞类型进行摸索。

niwanmao

xlswy1984 发表于 2013-10-29 22:34

                               
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谢谢您的回答。
关于PI，我还是有些疑问。 我是CD14, CD16抗体染色后，然后固定后，再上机的。那如果我多 ...

PI的染色，是应该在表面染色之后的，PI粉剂用PBS配成1ug/ml的PI工作液。
你在完成最后一步离心，去除上清，加入上述PI工作液代替平时的PBS重悬，然后过5分钟上机即可。

但是需要注意的是，你使用的表面抗体里面不能有PE标记的抗体。

至于补偿，你所说的设置是可以的。

niwanmao

xlswy1984 发表于 2013-10-29 23:22

                               
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我们实验室 有 PI 是 Biolegend公司买的那种，推荐的是10ul per 1mio. cells
那是不是就应该像一般抗体那 ...

你们那种PI染液是不是用来做细胞周期的？那不行的，那种染液所有的细胞都会染上。

因为PI和PE通道是一样的，不能一起测（有些coulter机器似乎在FL3检测）