大鼠Th17/Treg流式检测

niwanmao

1、Th17不刺激当然也会有，但非常微量，太难测，所以还是需要刺激，至于刺激出的量，肯定不同的。
2、PMA和离子霉素是刺激，莫能霉素是阻断剂，按顺序使用：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-716-1-1.html
3、可以分开，最好分开，具体方案参见上面的链接。
4、对于这类低表达的指标，建议用FMO对照，例如你用CD4+CD25+Foxp3测Treg，那么用CD4、CD25作为FMO对照，同样IL17A也一样设置。

niwanmao

倪shunlan 发表于 2014-8-1 10:05
老师，大鼠的细胞内因子也是由PMA和离子霉素刺激，莫能霉素阻断的，是吗？
谢谢！ ...

可以参考BD网站上的相关protocol，该Protocol是检测IL-4和IL-10的，但应该还是适用IL-17的：IL-4+ and IL-10+ rat cells:
Purified splenic CD4+ cells from an adult rat are stimulated with plate-bound anti-rat CD3 (clone G4.18, 25 µg/ml;  ) and soluble anti-rat CD28 (clone JJ319, 2 µg/ml;  ) for 2 days in culture together with recombinant rat IL-2 (10 ng/ml;  ) and rrIL-4 (50 ng/ml;  ), followed by a 3 day incubation with only rrIL-2 and rrIL-4. This is followed by a 4-6 hr stimulation with PMA (5 ng/ml; Sigma,) and ionomycin (500 ng/ml; Sigma) in the presence of a protein transport inhibitor. Alternatively, can restimulate with plate-bound anti-rat CD3 and soluble anti-rat CD28 for 4-6 hr in the presence of a protein transport inhibitor (either GolgiStop , or GolgiPlug ).


来源：http://www.bdbiosciences.com/res ... s/cytokines_fca.jsp

niwanmao

以梦为x马 发表于 2015-1-25 09:07
我做Treg，标记有CD4、CD25、Foxp3。     
对照能否加CD4，CD25同型对照，Foxp3就不加了，这样可以吗 ...

1管CD4、FoxP3
1管CD4、CD25
不用同型。