免疫缺陷鼠注射car-t后取血流式抗体染色检测的方法

菜鸟

用免疫缺陷鼠造模，小鼠注射car-t细胞后一周取血检测小鼠体内car-t细胞，检测方法是染抗体用流式细胞仪检测。想问一下取血后怎么进行抗体染色？

菜鸟

niwanmao 发表于 2017-6-27 14:36
不知道你的目的是检测什么指标？也不知道你的检测方案如何。
抗体染色如果做胞膜的，很简单，先加抗体，再 ...

是检测小鼠血液中CD3门内car-t细胞的阳性率。您说的方法是小鼠取血后加scfv的抗体，孵育15分钟，加红细胞裂解液，裂解10min，离心去上清，就可以直接上机检测。
我们现在的方法是先裂解离心去上清，在加抗体孵育20min上机检测，检测不到阳性的car-t细胞。
我们的方法存在问题吗？

菜鸟

是检测小鼠血液中CD3门内car-t细胞的阳性率。您说的方法是小鼠取血后加scfv的抗体，孵育15分钟，加红细胞裂解液，裂解10min，离心去上清，就可以直接上机检测。
我们现在的方法是先裂解离心去上清，在加抗体孵育20min上机检测，检测不到阳性的car-t细胞。
我们的方法存在问题吗？
@niwanmao

菜鸟

niwanmao 发表于 2017-6-28 19:50
建议你这样：
1、用Fc Blocker先阻断。
2、标记抗体。

Fc Blocker阻断的意义的在哪？