modfitl软件原理

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如果你说的PI值指的时PI的荧光强度的话，它是带有PI的细胞经过流动室被激光激发，所发出的荧光被光电倍增管转化为电信号并放大产生的一个表征荧光强度的数值。同一个样品在不同的流式细胞仪中因为有不同的换算方法会产生不同的数值，在同一台仪器的不同电压下，同样的荧光强度也会产生不同的数值。因此比较两台不同的流式细胞仪产生的荧光强度数值没有意义，除非同时还用校准微球做了校准。
modfit的基本工作原理是：提前设置G0/G1峰、S期峰（平顶）、G2/M期峰（即软件建立理想细胞周期模型），调整这三个峰在PI通道的位置、高度、宽度等参数，将这三个峰跟要分析的数据峰尽可能重叠（数据拟合）。统计这三个峰所覆盖的原始数据峰各通道细胞所占总细胞的比例，从而得到各个分裂时期的细胞比例。实际使用中，软件除了计算细胞周期各期细胞比例，还会计算G2/G1的值，CV%，RCS，碎片率等信息。
CFSE检测增殖，是利用CFSE可以在细胞内无毒且稳定存在的特性，随着细胞分裂，CFSE会被平均分配到两个子代细胞中，每个细胞的荧光强度减半。所以CFSE增殖实验一般是看CFSE通道峰的数量，很少看亲本的荧光强度。至于你说的有的实验中CFSE的荧光强度是某几次实验的2倍，在肿瘤细胞中是有可能出现的，但是理论上PBMC不会出现初代细胞全部消失的，所以这个现象可能跟仪器稳定性有关。理论上，CFSE实验的中位荧光强度会随着培养时间的延长而降低。