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许多流式细胞仪和细胞分选仪可以配置使用紫光侧向散射。红细胞中含有血红蛋白,这种分子能够显著吸收紫光激光(405 nm),而白细胞则不具备这一特性(Ost et al.,1998),因此在检测人全血时,蓝光侧向散射(488 nm,BSSC)和紫光侧向散射(405 nm,VSSC)会产生独特的散射模式。
单独使用蓝光侧向散射也能获得非常好的结果,甚至可以区分成熟过程中核化红系细胞的亚群(Fornas et al.,2002)。如果选择的流式细胞仪未配备紫光激光器,或滤光片配置不允许更改,仍然可以收集蓝光侧向散射信号,并进一步用于分类感兴趣的细胞。但需要注意的是,在全血样本中,蓝光的前向散射和侧向散射不能用来区分红细胞和白细胞。
信源:Rico LG, Salvia R, Ward MD, Bradford JA, Petriz J. Flow-cytometry-based protocols for human blood/marrow immunophenotyping with minimal sample perturbation. STAR Protoc. 2021;2(4):100883. Published 2021 Oct 11. doi:10.1016/j.xpro.2021.100883 |