严重皮肤不良反应 (SCARs) 是一组罕见但可能危及生命的皮肤反应，通常由药物暴露引起，并常常需要住院治疗。史蒂文斯-约翰逊综合征/中毒性表皮坏死松解症 (SJS/TEN) 和药物反应伴嗜酸性粒细胞增多和系统症状 (DRESS) 是两种最常见的 SCARs 类型。 两组之间的临床表现和预后明显不同。

调节性 T 细胞（Tregs）在维持免疫耐受和预防自身免疫方面发挥着关键作用。  Tregs 的作用与 DRESS 和 SJS/TEN 发展过程中观察到的不同症状有关。  有报告指出，DRESS 患者在恢复后 Tregs 功能失调，而 SJS/TEN 患者在恢复后 Tregs 功能似乎恢复正常。  因此，人们认为 Tregs 的动态和功能障碍是导致 DRESS 许多症状的原因，并被认为是 DRESS 恢复后某些患者出现自身免疫后遗症的潜在关键因素。

Khanaruksombat S等人的一项研究比较了 SJS/TEN 和 DRESS 患者在急性期和恢复期 Tregs 的免疫表型、抑制功能和 mRNA 表达。  

研究发现，在急性期，无论是否出现自身免疫后遗症，DRESS 患者的 Tregs 中 CTLA-4 表达水平均显著升高。  


只有未出现自身免疫后遗症的 DRESS 患者的 Tregs 中 OX40 表达水平升高更为显著。


而在 SJS/TEN 患者中，急性期 Tregs 中 IL-10 表达水平显著升高。


为了确定Treg功能是否有异常，研究通过共培养自体Tregs 和效应T细胞，确定Tregs的抑制功能，这个步骤值得大家参考具体步骤如下：

• 分离 Tregs 和效应 T 细胞:  使用 EasySep 人 CD4+CD127lowCD25+ 调节性 T 细胞分离试剂盒从参与者外周血单个核细胞 (PBMCs) 中分离出 Tregs (CD4+CD25+CD127− T 细胞) 和效应 T 细胞 (Teffs; CD4+CD25− T 细胞)。
  

2. Tregs 预激活:  将 Tregs 用抗人 CD3 (1 μg/mL) 和抗人 CD28 (2 μg/mL) 预激活过夜。
3. Teff 细胞静息:  将 Teff 细胞在 RF10 培养基（完全 RPMI 1640 培养基，含10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺、1% 非必需氨基酸、100 IU/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）中静息过夜。
4. 包被 96 孔板:  用可溶性抗人 CD3 (10 μg/mL) 包被 U 型底 96 孔板过夜，并在使用前用 PBS 洗涤。
5. 共培养 Tregs 和 Teff 细胞: 将 CFSE 标记的 Teff 细胞 (1 × 104 个细胞) 单独培养或与预激活的自体 Tregs 以 1:1 至 1:0.25 的 Teff/Treg 比例共培养在预先包被的 U 型底 96 孔板中。
6. 重新刺激共培养细胞:  用 2 μg/mL 可溶性抗 CD28 和 200 pg/mL 重组人 IL-2（无载体）在 RF10 培养基中重新刺激共培养细胞。
7. 培养和分析:  将细胞在 37°C、5% CO2 的环境中培养 5 天，然后通过流式细胞术分析 Teff 细胞增殖。
8. 计算抑制百分比:  使用以下公式计算抑制百分比：（单独培养的 Teff 细胞的增殖百分比 - 与 Tregs 共培养的 Teff 细胞的增殖百分比）/（单独培养的 Teff 细胞的增殖百分比）×100。


结果表明:

• 与健康对照组相比，恢复期 SJS/TEN 受试者的 Tregs 具有明显更强的抑制功能，而 DRESS 患者的 Tregs 在两个阶段的抑制功能略有受损，Treg:Teff 比例为 1:1。
  

在急性期和恢复期，从 SJS/TEN 患者身上收集的 Tregs 的抑制能力明显强于 DRESS 患者的抑制能力。
发生自身免疫后遗症的 DRESS 患者和未发生自身免疫后遗症的 DRESS 患者的 Tregs 抑制功能没有显著差异。



从以上结果可见，CTLA-4、OX40 和 IL-10 在 DRESS 患者的急性期和恢复期中发挥着重要作用，而 Tregs 抑制功能的减弱可能与 DRESS 的发病机制有关。


参考文献：Khanaruksombat S, Buranapraditkul S, Thantiworasit P, et al. Dysregulation of Regulatory T Cells and Autoimmune Sequelae in DRESS: Insights From Flow Cytometry and NanoString Analysis. Exp Dermatol. 2024;33(11):e70007. doi:10.1111/exd.70007

如山如河 发表于 2024-11-14 13:46
请问如何同时对Foxp3和IL10进行染色啊？

刺激后，用foxP3固定、破膜试剂盒，之后IL-10和foxP3一起染

请问如何同时对Foxp3和IL10进行染色啊？

niwanmao 发表于 2024-11-14 14:26
刺激后，用foxP3固定、破膜试剂盒，之后IL-10和foxP3一起染

好的谢谢大佬，下次我试试。