肝素诱导血小板减少症（HIT）是一种矛盾且潜在严重的肝素不良反应。虽然肝素本应预防血栓形成，但在某些患者中却会诱导产生抗血小板因子4(PF4)-肝素复合物抗体，反而导致危险的血栓形成。

目前，HIT的诊断需要多个步骤：评估临床可能性、检测抗PF4/肝素抗体，以及进行功能试验以确认血小板活化。传统的功能试验如光透射比浊法（LTA）和血清素释放试验（SRA）操作复杂、耗时且缺乏标准化。在这项发表于《Br J Haematol》（IF 5.1分）的研究中，研究人员探索了成像流式细胞术（IFC）作为HIT诊断的新方法，将流式细胞术的高通量能力与显微成像相结合，分析血小板活化模式。

材料与方法
研究采用ImageStream平台进行成像流式细胞术分析，该平台可以采集每个细胞多达12张不同通道的图像：明场、暗场以及最多10个荧光通道。

从健康供者采集血液样本以获得富血小板血浆（PRP），接着将这些血小板分组处理：
1. 对照条件（静息状态）
2. TRAP-6（凝血酶受体活化肽）作为阳性对照
3. 含低剂量（1 IU/mL）和高剂量（500 IU/mL）普通肝素的患者血浆样本

流式细胞术分析过程：
- 使用CD41a-FITC和CD42b-APC抗体识别血小板
- 使用CD62P-BV421（P-选择素）表达评估活化状态
- 样本体积：标准方案300 μL，改良方案50 μL
- 血浆稀释比例：1:2.2（标准）和1:5（改良）
- 每个样本获取至少10,000个单个血小板事件
- 分析聚焦于六个关键形态学特征：

• 大小参数：面积、直径、长轴
• 形状参数：圆度
• 纹理参数：对比度、调制度
  

结果
1、形态学特征验证：
- 活化血小板的以下指标显著增大：

• 面积（从25.6 μm²增至30.7 μm²）
• 直径（从5.64 μm增至6.12 μm）
• 长轴（从6.36 μm增至6.83 μm）
• 圆度（从10.6增至11.2）
• 对比度（从5.11增至5.70）
  

下面的左图就是TRAP-6 激活的CD62P阳性血小板，右图是静息状态的CD62P阴性血小板，在明视野通道以及 CD62-BV421、CD41a-FITC 和 CD42b APC 通道中观察血小板



2、诊断性能：
长轴特征成为最佳诊断标志：
- 敏感性：89.3%
- 特异性：92.9%
- 性能与传统CD62P表达检测相当

3、面积和直径特征显示相似结果：
- 敏感性：85.7%
- 特异性：92.9%

表1：不同参数的诊断性能比较


研究通过多个血小板供者验证了这些发现，其中大小相关参数（面积、直径和长轴）在6个供者中的5个中表现一致良好。这种重复性增强了该新方法的临床应用潜力。

研究人员还证明了他们的方法在标准和改良方案中都能有效工作，使其适应不同实验室环境。最主要的是该技术不需要放射性标记物且样本制备简单，相比传统功能试验具有显著优势。


参考文献：Carré J, Demont Y, Mouton C, et al. Imaging flow cytometry as a novel approach for the diagnosis of heparin-induced thrombocytopenia. Br J Haematol. Published online December 10, 2024. doi:10.1111/bjh.19945IF: 6.5 Q1