多数情况下，我们会认为，将组织解离为单细胞悬液，再加入DMSO等冷冻保护剂，可更好的维持细胞完整性和活力，更有利于后续流式或分子生物学研究。冻存细胞解冻的时候应在37℃水浴中进行快速解冻。

但也并非不能用完整组织冻存，例如以下几篇文章中都提到了直接将组织冻存的形式，不过组织块的大小还是建议尽量小。

Campos等人尝试了卵巢组织的冻存，通过腹腔镜剪刀收集约2.0×2.0 cm的卵巢组织样本，浸泡在营养M199培养基中。去除髓质组织残留、黄体和可能的出血性囊肿，使组织厚度不超过2.0 mm，仅保留卵巢皮质以利于冷冻保护剂溶液的渗透。他们发现尽管冷冻保存后卵泡存活率下降了约30%，但冷冻保存时间并不影响卵巢组织的形态或类固醇生成能力，且短期存储卵巢组织似乎不会损害卵泡的完整性 (Campos et al.,2011)。Jackson等人比较了四种不同的冷冻组织样本处理方法对DNA链断裂水平的影响。方法1是直接在解剖时切割小块肝组织并立即冷冻储存于-80°C，这种方法产生的DNA链断裂水平最低，%TDNA为6.15 ± 1.62。方法2是在解剖时收集较大的肝组织样本，冷冻后再在深冷金属板上切割，其诱导的DNA链断裂水平比方法1高3.7倍，%TDNA为20.58 ± 8.17。方法3同样收集较大的肝组织样本，冷冻后在液氮中的瓷研钵中研磨，诱导的DNA链断裂水平比方法1高3.4倍，%TDNA为17.92 ± 13.35。故认为冷冻小块组织是首选方法(Jackson et al.,2013)。

Hughes等人在人宫颈、阴道和结直肠粘膜组织保存中，采用了以下组织冻存和解冻方法：
- 冻存介质：将组织转移到含有200 μL 10%二甲基亚砜（DMSO）在胎牛血清中的冻存管中。
- 冷冻过程：将冻存管密封后，在Mr. Frosty控制冷却速率设备中以-1˚C/分钟的速率冷冻至-80˚C。然后在一周内将冻存管转移到液氮冷冻箱的气相中进行长期保存。
- 解冻过程：将冻存管置于37˚C水浴中，轻轻摇晃直至仅剩豌豆大小的冰块。然后用镊子或无菌转移移液管将解冻后的组织转移到10–20 mL室温细胞培养基中，让其平衡10分钟后再进行后续使用。

至于组织样本可以冻存多长时间，则取决于组织类型和下游应用的具体要求。一般而言，冷冻组织可以长期储存，通常长达数年，前提是其储存在适当的温度下（通常为-80℃或液氮中）(Bins et al.,2017)，Dupont等人验证了冷冻组织样本在-80°C下保存的中位时间为94天，时间范围为91-107天，DNA甲基化谱在冷冻组织中保持稳定 (Dupont，2023)。


References:
- Bins, S., Cirkel, G., Hooijdonk, C., Weeber, F., Numan, I., Bruggink, A., … & Lolkema, M. (2017). Implementation of a multicenter biobanking collaboration for  next-generation sequencing-based biomarker discovery based on fresh frozen pretreatment tumor tissue biopsies. The Oncologist, 22(1), 33-40. https://doi.org/10.1634/theoncologist.2016-0085
- Campos, J., Silva, J., Carvalho, B., Vireque, A., Sá, M., & Rosa‐e‐Silva, A. (2011). Cryopreservation time does not decrease follicular viability in ovarian tissue frozen for fertility preservation. Clinics, 66(12), 2093-2097. https://doi.org/10.1590/s1807-59322011001200015
- Dupont, M. (2023). Fresh and frozen cardiac tissue are comparable in dna methylation array β-values, but formalin-fixed, paraffin-embedded tissue may overestimate dna methylation levels. Scientific Reports, 13(1). https://doi.org/10.1038/s41598-023-43788-2
- Hughes SM, Ferre AL, Yandura SE, et al. Cryopreservation of human mucosal tissues. PLoS One. 2018;13(7):e0200653. doi:10.1371/journal.pone.0200653.
- Jackson, P., Pedersen, L., Kyjovska, Z., Jacobsen, N., Saber, A., Hougaard, K., … & Wallin, H. (2013). Validation of freezing tissues and cells for analysis of dna strand break levels by comet assay. Mutagenesis, 28(6), 699-707. https://doi.org/10.1093/mutage/get049