巨细胞病毒(CMV)和EB病毒(EBV)是最常见的疱疹病毒，在西方成年人群中EBV感染率高达95%，CMV感染率接近50%。这两种病毒在初次感染后会在人体内建立终身潜伏感染。虽然免疫功能正常时通常无症状，但这些病毒会随着年龄增长显著影响免疫系统。

CMV已被证实会导致CD8+ T细胞的增多和CD4/CD8 T细胞比例倒置,这种免疫风险特征(IRP)与80岁以上健康老年人的2年死亡率相关。然而,EBV对免疫衰老的影响研究较少。

Müller-Durovic等人深入研究了CMV和EBV潜伏感染对NK细胞亚群的影响，尤其是是CD56阴性NK细胞的变化及其功能特征。研究共纳入了38名60岁以上的健康人，中位年龄64岁。通过流式细胞术（FACS）分析外周血单个核细胞（PBMCs），排除死细胞和粘连体，设门确定NK细胞亚群。

NK细胞亚群的分类：基于CD56和CD16的表达，将NK细胞分为CD56bright、CD56dim和CD56neg三个亚群。

功能测试：通过FACS分选CD56neg和CD56dim NK细胞，测试其对K562靶细胞和细胞因子刺激的细胞毒性、IFN-γ产生和杀伤能力。

结果发现：

1、年轻CMV+健康人CD56neg NK比例没有明显变化，而在60岁以上健康老年人中，CD56neg NK细胞只在CMV/EBV双重感染者中显著增多:

• CMV/EBV双重感染组CD56neg NK细胞比例升高更为显著
  

- CD56neg NK细胞的增多伴随着CD56dim NK细胞数量的减少
- 单独CMV或EBV感染组未见CD56neg NK细胞明显增加

2、CD56阴性NK细胞功能受损。功能实验显示CD56neg NK细胞相比于CD56dim NK细胞:
- 对K562靶细胞的裂解能力降低约40%
- CD107a表达水平降低50-60%
- IFN-γ产生能力下降约45%
- 在CMV/EBV双重感染者中功能缺陷更为显著



3、CD56阴性NK细胞与免疫风险特征相关。分析发现CD56neg NK细胞比例与:
- CD8+ EMRA T细胞比例呈正相关(R2=0.42,p<0.001)
- CD4/CD8 T细胞比例呈负相关(R2=0.38,p<0.001)
- CD27-CD28- T细胞比例呈正相关(R2=0.35,p<0.001)

4、CD56阴性NK细胞表型特征:
- 表达低水平的CD57和KIR
- T-bet表达降低但Eomes表达正常
- 未见细胞衰老特征
- PD-1和TIM-3等抑制性受体表达未升高


以上种种证据，提示CD56neg NK细胞可能是评估老年人免疫风险的新型标志物。

参考文献：Müller-Durovic B, Grählert J, Devine OP, Akbar AN, Hess C. CD56-negative NK cells with impaired effector function expand in CMV and EBV co-infected healthy donors with age. AGING. 2019;11(2):724-738.