在血液科临床中，区分T细胞增殖是“反应性”还是“克隆性”（即恶性）是诊断与治疗的关键。传统的分子检测（如TCR基因重排分析）虽被视为“金标准”，但耗时长、成本高。多参数流式细胞术（MFC）的TCR-Vβ库分析更为快速和灵活。一项来自意大利的20年回顾性研究（纳入307例患者）证实，该方法与分子检测结果完全一致，且更快速、经济。

  
1、样本处理

• 外周血样本在采集后24小时内染色。采集前避免对患者使用激素类药物。
• 使用EuroFlow推荐的单克隆抗体组合，覆盖T/NK/B细胞系列抗原（如CD45、CD3、CD4、CD8、TCR-αβ/γδ等）。
  

2. TCR-Vβ库分析专用试剂  

• 采用Beckman Coulter Beta Mark TCR Vβ Repertoire Kit®，包含8管预混抗体，覆盖24种TCR-Vβ家族（占正常人类Vβ库的70%）。
• 每管含三种不同荧光标记（FITC、PE、双标）的抗体，通过8个FITC/PE点图分析Vβ家族分布。
  

3. 设门策略与数据解读  

• 首先在SSC/CD45散点图中圈选淋巴细胞，再聚焦CD3+细胞。
• 进一步划分CD4+和CD8+亚群，通过异常免疫表型（如CD7缺失、NK抗原共表达）辅助设门。
• 判定克隆性的标准：
• 单族扩增：某一Vβ家族占比显著升高（如Vβ13.1占15.3%病例）。
• 克隆谱系阴性（Clonogram-off）：所有24种Vβ家族均未检测到，提示单克隆细胞表达的是试剂盒未覆盖的Vβ类型（占32.5%病例）。
  

结果：流式与分子检测一致性好

1. 样本特征  

• 307例患者中，93%为αβ TCR表型，7%为γδ TCR表型。
• 确诊为T细胞淋巴增殖性疾病（TLD/T-NKLD）占91%，仅9%为反应性增殖（PTL）。
  

2. 流式Vβ分析的性能

• 在215例同时接受流式和分子检测的患者中，两者一致性达100%。
• 单族扩增：63%病例通过此模式识别（如Vβ13.1、Vβ8、Vβ2常见）。
• 克隆谱系阴性：32.5%病例通过此模式推断克隆性，分子检测均证实为单克隆。主要与分子重排的Vγ2-8Jγ1.3 (32.1%)、Vγ9Jγ1.3 (15.7%)、Vγ2-8Jγ1.3 (13.5%)和Vγ10Jγ1.3(10.7%)相关。
  

3. 特殊病例  

• 8例表面看似“反应性”的CD8+/HLA-DR+病例，通过Vβ分析发现克隆性，最终确诊为淋巴瘤。
• γδ TCR病例中，57%通过“Clonogram-off”识别克隆性。
  

这项跨越20年的研究证实，TCR-Vβ流式分析不仅与分子检测结果完全一致，更能快速、经济地识别T细胞克隆性。对于疑似T细胞淋巴增殖性疾病的患者，将其纳入常规流式检测组合，可显著提升诊断效率，减少患者等待时间。

参考文献：Antonacci M, Micozzi J, Costa A, et al. T-cell Receptor (TCR)-Vβ Repertoire Flow Cytometry for T-cell Lymphoproliferative Disorder: a Retrospective Analysis of a Single-Center Real-Life Laboratory Experience. Mediterr J Hematol Infect Dis. 2025;17(1):e2025016. Published 2025 Mar 1. doi:10.4084/MJHID.2025.016IF: 2.0 Q3