抗体介导的受体内化检测

飞翔

最近在做抗体介导的细胞膜上受体内化检测，检测受体内化率，大家有做过的吗？我们主要检测不同抗体的介导的抗体内化的高低，因为流式没有561激光器，不能检测pHrodo™ Red荧光，而pHrodo™ Green上游不能有效链接到检测目的抗体的二抗上，也没有用。都是用检测细胞膜上抗体在37度孵育几个小时后的剩余受体的MFI值，与4度不内化时的比值，进行内化的检测。大家有其它好的方法吗？


另有领导质疑这种检测细胞膜表面剩余受体方法的准确性，认为应该检测抗体介导后进入细胞内部的量，大家有什么建议

niwanmao

最直观的是不是还是荧光显微镜？

飞翔

niwanmao 发表于 2022-8-7 15:38
最直观的是不是还是荧光显微镜？

有一种高内涵设备可以检测，类似荧光显微镜，不过这个检测需要给出相对值，还有内化率，比较不同抗体介导的内化差异，

JUN1

想问一下楼主的问题解决了吗？以及我们现在也计划用4度和37度来算内化率，如果可以的话，楼主能分享一下protocol吗

cathyfxx

不知道这对楼主有用不，楼主有用过DT3C吗？DT3C可以与IgG偶联，形成mAb-DT3C偶联物，当偶联物被靶细胞内化时，mAb-DT3C 偶联物降低细胞活力。文献参考：Development of a sensitive screening method for selecting monoclonal antibodies to be internalized by cells

飞翔

cathyfxx 发表于 2024-2-7 14:50
不知道这对楼主有用不，楼主有用过DT3C吗？DT3C可以与IgG偶联，形成mAb-DT3C偶联物，当偶联物被靶细胞内化 ...

DT3C也是一种方式，不过有的人说这种方式检测的也不那么准确，因为偶联毒素和linker不同