间接法结合检测，抗体浓度

飞翔 · 发表于 2022-9-15 21:14:40

本帖最后由飞翔于 2022-9-17 06:51 编辑

最近进行流式间接法进行抗体结合梯度检测，细胞铺板后，一抗由高浓度进行梯度稀释4℃孵育1h，清洗后加二抗孵育0.5h，清洗后上机检测，由500ug/ml进行梯度稀释，高浓度点结合异常，可能是什么原因呢，一抗浓度太高了吗？

niwanmao · 发表于 2022-9-16 08:00:55

主要是Ab2出现，其它三个单抗看起来还是可以的。
Ab2的图形能看一下吗？

飞翔 · 发表于 2022-9-17 06:53:14

本帖最后由飞翔于 2022-9-17 21:21 编辑

niwanmao 发表于 2022-9-16 08:00
主要是Ab2出现，其它三个单抗看起来还是可以的。
Ab2的图形能看一下吗？

补充了图片，按这个图像是高浓度非特异性结合吧，起始浓度33ug/ml以下比较好

niwanmao · 发表于 2022-9-17 21:39:12

飞翔发表于 2022-9-17 06:53
补充了图片，按这个图像是高浓度非特异性结合吧，起始浓度33ug/ml以下比较好 ...

标本应该同时包括阴性群和阳性群才行啊，否则非特异性增高，也容易被误认为好事了。

飞翔 · 发表于 2022-9-18 06:20:50

是的，是高表达细胞系都会结合，特殊高，按理细胞固定的细胞表面表达的受体数量一致，饱和后上平台会一致呀

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[结构和原理] 间接法结合检测，抗体浓度