大鼠主动脉内皮细胞蛋白表达的流式检测

ny1164

请教倪老师，目标是检测大鼠主动脉内皮细胞中的一些蛋白含量，计划用流式细胞术分析同时表达内皮细胞标志物和靶蛋白的细胞数量。选了CD31和vWF作为筛选内皮细胞的标志物。我想问的是，1.在用主动脉制备单细胞悬液时，有哪些技术细节要注意？比如，之前阅读了倪老师分享的“小鼠主动脉免疫细胞检测”的帖子，那个实验中用到了自制的aorta dissociation enzyme，不知道是不是必须使用，是的话有没有商业化的产品可以直接购买(目前我查了thermo，abcam，BD以及cellsignaling都没有。。)，再比如离心的参数等。2.我们选择的这两个内皮细胞的标志物是否合适？

niwanmao

可以自己配制酶消化液的，详细可参考：
Hu D, Yin C, Mohanta SK, Weber C, Habenicht AJ. Preparation of Single Cell Suspensions from Mouse Aorta. Bio Protoc. 2016 Jun 5;6(11):e1832. doi: 10.21769/bioprotoc.1832. PMID: 27335895; PMCID: PMC4913879.

至于标记，一般建议再加CD45和live/dead

ny1164

niwanmao 发表于 2022-10-19 19:54
可以自己配制酶消化液的，详细可参考：
Hu D, Yin C, Mohanta SK, Weber C, Habenicht AJ. Preparation of  ...

谢谢倪老师，您现在分享给我们的这篇和之前那篇视频的文章我都看了。想再和您请教两个问题。一个是，这两篇文章都是做的小鼠主动脉，一个用的是70μm的cell strainer 一个用的是100 μm孔径的，以您的了解，如果放在大鼠主动脉上，这个滤网应该用多少孔径的合适？二是，如果在大鼠主动脉上，以您的了解，这些酶消化液的浓度是否需要调整，需要的话，应该调整多少或者有没有一个计算公式啥的？

niwanmao

ny1164 发表于 2022-10-20 16:58
谢谢倪老师，您现在分享给我们的这篇和之前那篇视频的文章我都看了。想再和您请教两个问题。一个是，这两 ...

孔径其实不重要的，这两种直径，对细胞过滤都是绰绰有余的，主要是为了去除未消化掉的团块。

在大鼠上，我也没什么经验，对于组织的消化，从原理上感觉应该还是通用的。

ny1164

niwanmao 发表于 2022-10-20 20:18
孔径其实不重要的，这两种直径，对细胞过滤都是绰绰有余的，主要是为了去除未消化掉的团块。

在大鼠上， ...

感谢倪老师！我想知道过滤细胞的话，站里做的那个魔滤是否适用？

niwanmao

ny1164 发表于 2022-10-26 22:26
感谢倪老师！我想知道过滤细胞的话，站里做的那个魔滤是否适用？

可以的。

ny1164

niwanmao 发表于 2022-10-27 08:15
可以的。

好的，谢谢倪老师！