线粒体膜电位JC-1检测

linxr8

                               
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各位老师，我对细胞处理之后，凋亡细胞比例增加了，理论上应该是线粒体膜电位降低，绿光强度增加了，但是为什么红光强度也增加了，求red:green比值就反而升高了，与预期趋势相反，请问是什么原因

niwanmao

补偿是否调到位了？如果有可能，回复时，点击“高级模式”，通过编辑器工具栏上传图片或FCS文件，大家一起看看。

linxr8

老师老师，我上传FCS文件了，好几次都是这样，明明从散点图看就有线粒体膜电位下降的趋势，但是红光强度就是升高，而绿光强度升高不明显。我每次都没有调补偿，细胞是空白细胞，没有带任何荧光，我就没调补偿了，感谢老师解答

niwanmao

linxr8 发表于 2022-11-12 19:11
老师老师，我上传FCS文件了，好几次都是这样，明明从散点图看就有线粒体膜电位下降的趋势，但是红光强度就 ...

下载了第一个压缩包，看到里面两个文件，e和e-dmxaa，不清楚你这是什么细胞，两管之间有什么差异，只能看到两管分群差不多。
让其它人帮忙，很多相关的实验信息，都是需要提供的。

linxr8

老师，麻烦再帮忙看下第二个压缩包的文件，这两组做了流式凋亡检测是有差异的，镜下看也是有凋亡细胞比例的差异，实验室其他人不做这个实验也不懂

niwanmao

linxr8 发表于 2022-11-13 16:37
老师，麻烦再帮忙看下第二个压缩包的文件，这两组做了流式凋亡检测是有差异的，镜下看也是有凋亡细胞比例的 ...

前面不是说了吗，你两组编号分别代表什么意思，需要解释给我们听啊。

细胞是什么细胞？
两组编号分别代表什么？
只染了JC-1还是还染了别的？
电压你是如何定义的？

wxd

不知道你的分组里有没有对照组。我就当你没有做了。建议你做一下以下这几组：
Blank组：正常培养的细胞，不染色，上机检测。目的是确定JC-1是否还有染色能力；
CCCP组：正常培养的细胞，加CCCP处理20 min，离心弃上清之后JC-1染色，然后上机检测。CCCP可以使线粒体膜电位下降或消失。是线粒体膜电位检测的阳性对照；
Control组：正常培养的细胞，JC-1染色后上机检测。目的是与CCCP组配合，确定JC-1是否工作正常，并确定画门界限。

AIRYY

wxd 发表于 2022-11-21 09:19
不知道你的分组里有没有对照组。我就当你没有做了。建议你做一下以下这几组：
Blank组：正常培养的细胞，不 ...

老师您好，我最近在做JC-1。想请教您，CCCP组上机检测的时候是选择FITC单通道吗？还是FITC通道和PI通道同时选择？
Control组上机检测的时候是选择PI单通道吗？还是FITC通道和PI通道同时选择？

wxd

JC-1检测，不管是上哪个样品，都是FITC和PI通道同时选择的。CCCP组和Control组也不例外，如果有Blank组，也是一样的。