APC和PI，PerCP的补偿问题

wmj123456 · 发表于 2022-12-8 16:18:23

倪老师，您好，想请问两个问题，1APC和PI之间没有补偿，是因为他们的发射光谱几乎没有重叠，还是他们是由不同的激光器激发导致的？不同激光器激发的荧光染料之间存在补偿吗？2如果是不同的激光器之间几乎没有补偿，那么APC和PerCP之间为何补偿那么大？APC是640nm激发，PercP是488nm激发的？谢谢您的解答。

Merci · 发表于 2022-12-8 18:42:26

PerCP，PE-Cy5，PerCP-Cy5.5 PE-Cy5.5 这几个荧光素都可以在PerCP通道使用，所以你先确认荧光素是哪种，如果是PE偶联的染料是可以被640nm激发的。有些机器APC和PerCP是有补偿的，可能跟机器光路设计或光学接收元件有关

niwanmao · 发表于 2022-12-8 19:41:08

虽然是不同激光器激发，但是光路是共线性的，因此仍存在补偿。

wmj123456 · 发表于 2022-12-8 22:30:37

Merci 发表于 2022-12-8 18:42
PerCP，PE-Cy5，PerCP-Cy5.5 PE-Cy5.5 这几个荧光素都可以在PerCP通道使用，所以你先确认荧光素是哪种，如 ...

您好，我是指的PerCP

wmj123456 · 发表于 2022-12-8 22:42:20

我这有一张用Cytek光谱查看器看的APC和PerCP的光谱图，是否说明了他俩都可以被640激发，在这个激光器下，二者的补偿比较大？但是如果PerCP是488激发的，这时候他俩就没有补偿了？

Merci · 发表于 2022-12-9 08:52:33

wmj123456 发表于 2022-12-8 22:42
我这有一张用Cytek光谱查看器看的APC和PerCP的光谱图，是否说明了他俩都可以被640激发，在这个激光器下，二 ...

从传统流式上看，这两个通道本来就是需要用两个激光器激发，APC-640nm PerCP-488nm 原理上看应该不会出现很大的补偿。但就像倪老师说的，不同激光器发出的光路是会存在共线性的问题。这两个通道发射波长很近和机器本身也有一定关系。您用的是全光谱流式吗？没有用过，所以不知道这个回复能不能帮到您

wmj123456 · 发表于 2022-12-9 09:45:19

Merci 发表于 2022-12-9 08:52
从传统流式上看，这两个通道本来就是需要用两个激光器激发，APC-640nm PerCP-488nm 原理上看应该 ...

请问您们说的光路是共线性是说最后不同激光器激发的光可能会在同样的发射光谱范围内接受？您用BD做的光谱图，我可以看明白，只是我现在还有个疑问，想跟您再确定下，就是在看补偿的时候，如果是不同的激光器激发，那么两者之间的补偿理论上会比较小，但是如果在光谱图里发现发射光谱比较接近的时候，就可能会有补偿了？但是具体补偿的大小也是要看仪器光路设置的，是可以意思吗？又譬如，BUV737和BV711，分别在355和405nm激光下有最大激发效率，传统也是用这两个激光器激发，那么他俩之间的补偿会比较小。但是由于他俩的发射光谱很接近，所以他俩也是存在补偿的了？

wmj123456 · 发表于 2022-12-9 09:47:15

这是BUV737和BV711的光谱图

Merci · 发表于 2022-12-9 12:42:12

本帖最后由 Merci 于 2022-12-9 12:43 编辑

个人认为，如果您是做实验可以不要过于纠结这个问题，结果能做好就行。如果您是研究光谱这个方面的，可以找光学设计专家来探讨。理论和实际并不是完美重合的。毕竟和机器的硬件设计，激光器的设计，光路走向，光学元件接收，滤光片的选择，信号处理都有关系

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[结构和原理] APC和PI，PerCP的补偿问题