分析T细胞增殖的时候，是否需要去除死细胞

GoodMaoning

实验流程是分选出来的T细胞染CFSE，用CD3/CD28 Dynabeads活化3天后收集细胞，上机检测之前只染了L/D（细胞活率接近90%）。


实验数据正常，但是在分析的时候有点疑惑，多数人是从single cells里面先圈出活细胞，然后得出活细胞中的增殖比例；
但是由于死细胞多数都是原代细胞，那么去除死细胞的话，T细胞增殖比例还准确吗？

为什么不能直接从single cells里面分析T细胞增殖呢。

niwanmao

死细胞究竟是哪一代，应该不好确定，而且死了之后，染料是也存在外漏的可能。

只有活细胞才是真实的。

GoodMaoning

niwanmao 发表于 2023-1-16 12:15
死细胞究竟是哪一代，应该不好确定，而且死了之后，染料是也存在外漏的可能。

只有活细胞才是真实的。

谢谢倪老师的解答，我理解了。

wmj123456

倪老师，死细胞应该不会增殖吧？所以看死细胞的意义不大，只能圈出活细胞看增殖。这种解释合理吗

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-1-29 22:20
倪老师，死细胞应该不会增殖吧？所以看死细胞的意义不大，只能圈出活细胞看增殖。这种解释合理吗 ...

嗯，死细胞确实不会增殖，理论上停留在死亡的那个代数，但是究竟其死在哪一代，死亡后染料外漏是否会导致误判为下一代，都是变数。所以多种因素综合，需要排除死细胞。

wfjprs

您好，我想请教下你分选用的也是磁珠吗？CD3/CD28 Dynabeads好用吗？

462868793

niwanmao 发表于 2023-1-30 07:48
嗯，死细胞确实不会增殖，理论上停留在死亡的那个代数，但是究竟其死在哪一代，死亡后染料外漏是否会导致 ...

老师，说到死细胞，我设的只染CFSE不进行CD3/28刺激的对照组养了72小时后，用死活染了看都不剩什么活细胞了，这正常吗，而且把仅剩的活细胞圈出来的CFSE还能当做第一代峰的对照吗

niwanmao

462868793 发表于 2023-8-27 12:04
老师，说到死细胞，我设的只染CFSE不进行CD3/28刺激的对照组养了72小时后，用死活染了看都不剩什么活细胞 ...

不刺激的话，淋巴细胞容易凋亡，在细胞状态欠佳的时候，做功能学试验，不太建议。

范晋波

462868793 发表于 2023-8-27 12:04
老师，说到死细胞，我设的只染CFSE不进行CD3/28刺激的对照组养了72小时后，用死活染了看都不剩什么活细胞 ...

找你这个处理，还不如直接拿新鲜的初代当对照。。。