TREG细胞固定破膜后出现自发荧光？

archerliang

各位老师帮忙看一下，最近做TREG细胞，固定破膜染色后，空白对照出现了阳性群，这群是细胞的自发荧光吗？另外还想问一下，如果想做胞内抗体的同型对照，是在固定破膜后加入同型抗体还是在固定破膜前加入，谢谢各位。

niwanmao

从图上看，空白对照中的这种形状分布，是死细胞或固定引起。

同型抗体，看你要做的是表面抗体的还是胞内抗体，跟对应的抗体相同步骤加入。

archerliang

niwanmao 发表于 2023-3-8 16:58
从图上看，空白对照中的这种形状分布，是死细胞或固定引起。

同型抗体，看你要做的是表面抗体的还是胞内抗 ...

那如何避免呢？

niwanmao

archerliang 发表于 2023-3-9 10:02
那如何避免呢？

1、确保样本的新鲜和细胞活力，染色前先进行PI染色确认细胞活性或用台盼蓝确认。
2、固定和破膜，两个步骤缺一不可，且顺序不能反掉。若未固定，就直接进行破膜，则细胞也都会碎掉。

archerliang

niwanmao 发表于 2023-3-9 10:56
1、确保样本的新鲜和细胞活力，染色前先进行PI染色确认细胞活性或用台盼蓝确认。
2、固定和破膜，两个步骤 ...

倪老师，我们染色前都用aopi计数活率在八九十左右，制样时用的时biolegend固定破膜液进行制备，可依旧会产生上述情况

niwanmao

archerliang 发表于 2023-3-9 11:11
倪老师，我们染色前都用aopi计数活率在八九十左右，制样时用的时biolegend固定破膜液进行制备，可依旧会 ...

你目前用的是什么样本？

如果是培养的样本，建议先拿全血做一下固定、破膜的测试，看看是不是自己操作上哪个细节出了问题。很有可能的。

archerliang

niwanmao 发表于 2023-3-9 11:16
你目前用的是什么样本？

如果是培养的样本，建议先拿全血做一下固定、破膜的测试，看看是不是自己操作 ...

是培养了14天的treg，D0天的时候不会出现这种现象。我们该如何优化?

niwanmao

archerliang 发表于 2023-3-9 11:27
是培养了14天的treg，D0天的时候不会出现这种现象。我们该如何优化?

D0的图发上来看一下。

archerliang

niwanmao 发表于 2023-3-9 20:00
D0的图发上来看一下。

抱歉，倪老师，隔这么久才回信息。@niwanmao

niwanmao

archerliang 发表于 2023-3-31 10:04
抱歉，倪老师，隔这么久才回信息。@niwanmao

D0确实好很多，没有明显自发荧光。看来培养后有一部分细胞自发荧光明显增强。你试试活性胺类死活染料是否能排除掉这些信号。