一个简单的技巧，实现大分子抗体药物的内化（胞吞）检测

niwanmao

前几天赤道和北极站友发帖问道：大分子抗体药物，例如靶向细胞表面CD3分子，如何检测T细胞有没有胞吞该药物呢？有没有老师用流式做过类似实验或者设计呢，谢谢

虽未做过这方面资料，但是我还是认真去搜了文献，发现在2015年有篇文献恰好谈到了这个步骤，在此将此步骤编译分享给有相同需求的站友：

首先，需要将抗体药物标记上荧光素。此文献以APC标记其抗体药物CD3。

接着，靶细胞用500μl 预冷的RPMI（含2%BSA，10 mM HEPES， pH 7.4）重悬，加入100μl 荧光素标记的抗体药物，文献中是CD3 APC抗体（10μl抗体/10E6个细胞），抗体用量的宗旨就是过量，使结合呈饱和状态。

然后在4℃下孵育1小时，用5ml 预冷的RPMI（含2%BSA，10 mM HEPES， pH 7.4）洗涤两次以去除过量的抗体，重悬在1ml RPMI（含2%BSA，10 mM HEPES， pH 7.4）中，并在37℃下再次孵育以使得抗体药物内化。

内化完成后，将细胞分成两份：
一份加入2ml 预冷PBS（体现已结合的总抗体量，包括表面的和内化的）
另一份加入2ml 预冷的PBS（pH 2.0，酸洗作用，可去除表面结合的抗体，以检测内化/胞吞的抗体药物量），细胞酸洗45秒，然后用10ml 预冷PBS（含0.05%叠氮钠）中和。

最后，将两管样本离心，放入500μl 预冷PBS（含2.5μg/ml碘化丙锭）中。上机分析。

检测结果如下：


信源：Beltran-Sastre, V., Navarro, E. Measuring activity of endocytosis-regulating factors in T-lymphocytes by flow cytometry. Cytotechnology 67, 551–558 (2015). https://doi.org/10.1007/s10616-014-9696-1