检测周期时出现了奇怪的数据

wxt1997ann

各位老师好~我最近刚开始做周期，本来一切都很顺利，结果很正常很好，但是最近得到了两组去粘连时很奇怪的数据。

试剂盒：elabscience
仪器：Beckman
样本情况：这批样本细胞数比较少，收样的时候很慢。但因为细胞数比较少，我加入RNA酶的数量比平时减半了。但是RNA酶减半这个操作之前我也曾经做过，没有出现什么问题啊。
请各位老师帮忙分析下原因，十分感谢！
数据一：     



数据二：




正常数据：

niwanmao

具体原因说不好，但可以肯定是没染好，必须得重复。

wxt1997ann

niwanmao 发表于 2023-6-5 20:25
具体原因说不好，但可以肯定是没染好，必须得重复。

谢谢倪老师，有可能是什么原因呢？总结这几次失败的实验，一个统一的现象是细胞数很少。

niwanmao

wxt1997ann 发表于 2023-6-6 20:39
谢谢倪老师，有可能是什么原因呢？总结这几次失败的实验，一个统一的现象是细胞数很少。  ...

原因说不上来，只能看的出来细胞都碎了。得自己从每个步骤去逐一排查。

wxd

把前两张图P2门的位置挪一下看看。因为你出错的数据和正常的数据不是同一时间做的，仪器状态可能不太一样，不能用之前位置的门。

wxt1997ann

找到原因了！好像是因为固定后的细胞比较脆弱，不能用枪去吹打细胞。我更改实验条件为：清洗时PBS从稍高的地方加入，冲击下来后肉眼看没有明显的细胞团即可。如果有明显的细胞团，就稍微涡旋一下下。更改这个条件后，结果都很正常了。

niwanmao

wxt1997ann 发表于 2023-7-8 16:02
找到原因了！好像是因为固定后的细胞比较脆弱，不能用枪去吹打细胞。我更改实验条件为：清洗时PBS从稍高的 ...

这就是实验细节，细节决定成败。
这样的反馈，对以后其它FLOWER遇到类似的事情，非常有帮助。