我的IL17染上了吗

lukequ

染的TH17,FC阻断后加死活：APC-CY7,然后FITC-CD4,固定 破膜后pacifi blue-IL17.

lukequ

标本是小鼠脾脏研磨后淋巴细胞分离液分离

niwanmao

lukequ 发表于 2023-7-3 00:24
标本是小鼠脾脏研磨后淋巴细胞分离液分离

1、建议以后养成好习惯，每个通道都标上抗体名称，否则其它人帮你看问题很累 。
2、设门顺序，请改为先R4，再R4门内看IL17表达。

目前粗看，似乎没有染上或者没有刺激出来，刺激条件是什么样的？

lukequ

niwanmao 发表于 2023-7-3 08:40
1、建议以后养成好习惯，每个通道都标上抗体名称，否则其它人帮你看问题很累 。
2、设门顺序，请改为先R4 ...

怎么看没有染上，从图像形状看没有染色吗，刺激用BD的BD Pharmingen™ Leukocyte Activation Cocktail, with BD GolgiPlug™，目录编号:550583，说明书：The Leukocyte Activation Cocktail, with BD GolgiPlug™ is a ready -to-use polyclonal cell activation mixture containing the phorbol ester, PMA (Phorbol 12-Myristate 13-Acetate), a calcium ionophore (Ionomycin) and the protein transport inhibitor BD GolgiPlug™ (Brefeldin A).
刺激4.5小时，每200万细胞用3ul。
老师下次把抗体名称标上。

lukequ

老师是这样设门吗

niwanmao

lukequ 发表于 2023-7-3 13:43
怎么看没有染上，从图像形状看没有染色吗，刺激用BD的BD Pharmingen™ Leukocyte Activation Cocktail, w ...

看使用的试剂，应该是没有问题的，破膜的效果是否验证过，如果验证过的话，可能是真这么低吧。

lukequ

niwanmao 发表于 2023-7-3 14:01
看使用的试剂，应该是没有问题的，破膜的效果是否验证过，如果验证过的话，可能是真这么低吧。 ...

破膜也是用BD的BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation/Permeabilization Kit，但以前用过胞内染色也没有分群明显，不懂破膜剂有没有问题。我想弄一下未刺激的细胞为生物学对照，和刺激的对比，这样可以明确是否染上吧。

lukequ

lukequ 发表于 2023-7-3 14:06
破膜也是用BD的BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation/Permeabilization Kit，但以前用过胞内染色也没有分群明 ...

看这应该是染上了，感觉效果还行

lpp20230609

niwanmao 发表于 2023-7-3 14:01
看使用的试剂，应该是没有问题的，破膜的效果是否验证过，如果验证过的话，可能是真这么低吧。 ...

人的IL17表达大概在1%，他这个结果蛮好了，老师您好，我和他一样的试剂，但我做不出来阳性，请问可能的问题出在哪里呢，怎么都搞不出来，用的是买的工具细胞PBMC

niwanmao

lpp20230609 发表于 2024-6-4 16:41
人的IL17表达大概在1%，他这个结果蛮好了，老师您好，我和他一样的试剂，但我做不出来阳性，请问可能的问 ...

试一下正常人的全血看看吧。