分选得到的细胞活率很低，只有40%左右

雨雨雨鱼

最近在做小鼠脾脏的记忆B细胞分选，上流式前会用CD20磁珠把大量的阴性细胞去掉，保留CD20+细胞染抗体，分选时间上一次差不多花了50分钟，结果分选得到的阳性细胞活率很低，只有40%左右。我们分析可能和分选时间太长有关系。想问一下各位大佬除了缩短分选时间以外，能不能从别的方面改进一下提高细胞活率？之前听说分选得到的细胞保存在血清替代物里会好一点，我们现在是PBS加了一定比例的BSA，也不知道用血清替代物行不行？希望大佬们帮忙解答，谢谢啦

wxd

我们做流式分选，如果后续需要做培养，会在流式管里加入1 mL预冷血清，分选得到的细胞直接打到血清里，装满一管（4-5 mL）大概30-50 min，血清的终浓度在20%左右。在后续的培养中，前几天会适当提高血清浓度，比如正常培养用10%血清，分选后细胞的培养，就提高到15%-20%，同时提高双抗浓度。另外，分选后的细胞，没有特殊情况，我们都是分选一管，立刻离心，然后放到培养基中进行培养的，不保存。如果是离得比较远的单位，不管分选前还是分选完的细胞，都是插入冰水混合物中保存的，在准备细胞的时候，通知提前调整仪器状态，细胞到达之后立刻分析和分选，分选过程不超过4小时，从准备细胞到将完成分选的细胞放到培养箱，全程冰上操作，全过程不超过8小时。

Yuck

如果细胞量大，简单点就是用美天旎活性磁珠再分选一次。