细胞保存细胞碎裂如何处理

lukequ

染TH17，因为实验室晚上不开放，所以细胞刺激后最多只能染表面抗体，没时间染胞内抗体：IL17,染表面抗体后用多聚甲醛固定，清洗后用BPS+2%FBS重悬保存，第二天用BD的perm/wash破膜，用的是 破膜剂：BD Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Kit目录编号:554714，上机后发现很多细胞碎片，淋巴细胞很少，各位有什么方法解决吗？别人的实验室是染IL17后固定、保存（他们实验室晚上开放），第二天上机没有这个问题。

niwanmao

处理过程大体没问题，看来问题就出在操作细节上。

我们平时经常遇到类似的学生，同样的操作步骤教他们，就是做不好。

我的建议是这样：找个做成功的人，带你一下，观察其中的操作细节。

当然，也不排除标本本身的问题。

另外，在每一步操作之后，均在镜下观察一次细胞形态（台盼蓝染色），有助于你找到原因。这样的话，可能你自己就能找到问题所在。