流式来不及上机怎么办

hydwl2019

做脾脏细胞的流式，样品太多来不及处理，怎么处理比较好？1.脾脏PBS中4度冰箱放置 2.制备单细胞悬液冰箱放置 3.多聚甲醛固定后PBS重悬冰箱放置

niwanmao

进行流水线作业，一人负责取脾脏和解离单细胞，一人负责染色和上机，不要一次性处理太多，而是按顺序几个几个的做。

因为不知道你们要做什么指标，不太好推荐何种保存方式。一般含FBS的PBS重悬会较好。

hydwl2019

niwanmao 发表于 2023-7-10 08:40
进行流水线作业，一人负责取脾脏和解离单细胞，一人负责染色和上机，不要一次性处理太多，而是按顺序几个几 ...

CD4,CD25,CD5,CD1d，CD19,CD11c,CD40,CD80,CD86,MHCII，还有FoxP3这个要破膜的，请问FBS是百分之多少的呢

niwanmao

hydwl2019 发表于 2023-7-10 10:45
CD4,CD25,CD5,CD1d，CD19,CD11c,CD40,CD80,CD86,MHCII，还有FoxP3这个要破膜的，请问FBS是百分之多少的呢 ...

B、DC、Treg指标，相对还好，可以解离后，1~2％多聚甲醛固定保存。

染色Buffer，0.5-1% BSA 或 5-10% FBS

hydwl2019

niwanmao 发表于 2023-7-10 14:21
B、DC、Treg指标，相对还好，可以解离后，1~2％多聚甲醛固定保存。

染色Buffer，0.5-1% BSA 或 5-10% FB ...

谢谢倪老师，先染色在固定还是先固定再染色呢，哪种方式比较好

wanxgq

hydwl2019 发表于 2023-7-10 14:32
谢谢倪老师，先染色在固定还是先固定再染色呢，哪种方式比较好

先染色再固定。

niwanmao

hydwl2019 发表于 2023-7-10 14:32
谢谢倪老师，先染色在固定还是先固定再染色呢，哪种方式比较好

如果预试验中，各个CD分子表达强度不受固定影响，可以先固定再染色。

如果影响比较大，则需要先染色，再固定。