PBMC淋巴细胞增殖结果分析

Joliezz

各位老师好，我近期在做CFSE检测淋巴细胞增殖实验，不知道是PHA型别选的不对还是细胞状态不好，增殖不明显，流式图跟文献的也不一致，我们流式不能调电压，麻烦各位老师帮忙分析
实验方案：新鲜外周血PBMC染色浓度1.5x10^7，CFSE终浓度1uM、2.5uM、5uM，细胞铺板后加入PHA终浓度2.5ug/ml。培养4天。三个染色浓度的数据差不多，选取了2.5uM的。
A01:空白组
B01:CFSE单染组
B02:CFSE染色+刺激剂组

niwanmao

刺激管约9％在坐标轴外，是不是把那些细胞也放出来看一下，可能细胞增大了呢？

努力的阿棋

个人感觉刺激剂组细胞状态不太行，细胞碎片比例太高了，目标细胞群我只圈了10%左右，最后增殖基本看不出来，建议还是把刺激剂的浓度再确定一下，感觉毒性有点大，细胞状态不好会影响增殖的。

Joliezz

努力的阿棋 发表于 2023-7-25 11:37
个人感觉刺激剂组细胞状态不太行，细胞碎片比例太高了，目标细胞群我只圈了10%左右，最后增殖基本看不出来 ...

麻烦在问下，淋巴细胞是右下那群嘛。还有细胞状态不好，这实验细节上有没有需要注意的点，我们培养4天没有补液，不知道跟这有没有关系。

Joliezz

niwanmao 发表于 2023-7-24 18:04
刺激管约9％在坐标轴外，是不是把那些细胞也放出来看一下，可能细胞增大了呢？ ...

老师在帮看下

niwanmao

Joliezz 发表于 2023-7-25 17:31
老师在帮看下

这样看起来刺激组似乎都死了，是否刺激的浓度过大？或者其它原因？

努力的阿棋

Joliezz 发表于 2023-7-25 17:28
麻烦在问下，淋巴细胞是右下那群嘛。还有细胞状态不好，这实验细节上有没有需要注意的点，我们培养4天没 ...

右下那一群应该是淋巴细胞的，看另外两组状态还不错，应该是刺激组药物的问题，培养四天你要看培养液的颜色有没有变化，如果变化比较明显你可以补液或者换液。