细胞杀伤

guo919370840

各位老师，我们计划做细胞杀伤，效应细胞使我们自己诱导产生的，靶细胞是带GFP的稳转细胞株，计划用流式做杀伤，问一下，有没有protocol可参考，看网上的多数是用CFSE和PI或者DIO和PI什么的，CFSE和DIO抛开补偿遗漏严重不谈的话，这些和GFP通道是重合的，所以看看有没有其它的方法用流式来检测杀伤呢？

CBJ

guo919370840 发表于 2023-8-4 15:44
能不能具体一点啊

效应细胞靶细胞共孵育后去掉培养基，加入死活染料后即可上机，分析数据时去掉黏连细胞后，圈出GFP+细胞，再从GFP+细胞中圈死细胞，死掉的那些就是被效应细胞杀死的。铺细胞时准备一个效应细胞only、靶细胞only的孔，可以更好判断这两群细胞各自的位置。

tiger

靶细胞有GFP标签，直接加PI或7-AAD测GFP阳性细胞的坏死率就可以了。

guo919370840

tiger 发表于 2023-8-4 15:12
靶细胞有GFP标签，直接加PI或7-AAD测GFP阳性细胞的坏死率就可以了。

能不能具体一点啊

Yuck

CFSE/GFP都是染靶细胞，有一个就行，然后死活染料看靶细胞死亡率。再想深入就是给效应细胞也染个抗体荧光T染个CD3，NK染个5616一类。

bslhk

靶细胞是带GFP，就用gfp来圈靶细胞。测杀伤可以用流式计数来测杀伤率，也可以an-pi看调往

guo919370840

CBJ 发表于 2023-8-4 17:25
效应细胞靶细胞共孵育后去掉培养基，加入死活染料后即可上机，分析数据时去掉黏连细胞后，圈出GFP+细胞， ...

我想问一下  细胞死亡 GFP还表达吗  我看说是细胞彻底裂解以后，GFP蛋白降解以后，细胞才没有GFP，这种情况会不会影响杀伤结果呢?

CBJ

guo919370840 发表于 2023-8-23 15:08
我想问一下  细胞死亡 GFP还表达吗  我看说是细胞彻底裂解以后，GFP蛋白降解以后，细胞才没有GFP，这种情 ...

是的，细胞死亡后还没完全裂解是可以检测到GFP的，一般不会影响杀伤结果

CBJ

CBJ 发表于 2023-8-23 15:47
是的，细胞死亡后还没完全裂解是可以检测到GFP的，一般不会影响杀伤结果 ...

可以做一个对照，即靶细胞only的加死活染料，看一下与效应细胞共孵育同等时间后，靶细胞活率，用以辅助判断共孵育的杀伤率是不是真实的杀伤效果