小鼠脾脏细胞Ki67染色

ofbruce123

取了小鼠的脾脏细胞进行Ki67的染色，阳性对照组使用CD3/28抗体刺激24h。得到的结果对照组跟阳性对照组差别不大。而且按照FMO圈门的话CD8+细胞Ki67表达也过高了。
同时检测的别的指标有差异，所以应该不是CD3/28抗体的问题。
不知道有没有老师知道是哪个环节出了问题？万分感谢！

niwanmao

不清楚你的具体方案设计以及实验目的，但单纯看FMO和结果图形，感觉你这里的FMO无法用于设门，说明实验中的背景荧光，主要不是荧光渗漏，而是一些非特异性结合。

非特异性结合是多方面的：
1、死细胞
2、Fc受体
3、内部代谢物自发荧光

所以有必要从这些方面去逐一确认，才能保证设门的准确性。

ofbruce123

niwanmao 发表于 2023-8-29 15:29
不清楚你的具体方案设计以及实验目的，但单纯看FMO和结果图形，感觉你这里的FMO无法用于设门，说明实验中的 ...

好的，谢谢倪老师。我想了一下有可能是因为我一开始在染胞外的时候吹打重悬用力过大，导致细胞死亡率比较高。 我也考虑是不是因为电压过高导致分群不正常？因为我细胞群的位置好像都偏高。