4T1-luci细胞-流式检测

忞勣的FACS

弱弱问下啊：
我有一株4T1-luci细胞（带luciferase标记基因），体外分析（非动物成像），想分析该细胞的比例，能否用流式方法实现呢？
看D-萤光素钾盐说明书，生成560nm蓝绿色生物萤光，直接用选择通道接受这个光，可行吗？
但实际检测发现，同样品，用流式仪检测，对照组（不带luci基因标记的细胞）却和样品组（4T1-luci细胞）无差别；但用酶标仪（化学发光功能）分析时，确实是对照组发光值远低样品组，证明没有混样。
是不是说用流式方法检测就不可行呢？

niwanmao

忞勣的FACS 发表于 2023-10-19 08:54
酶标仪：Thermo Varioskan LUX，化学发光模块，没有用荧光模块；
流式仪：Agilent Novocyte Advanteon， ...

从这篇1994年的文章看（Flow Cytometric Analysis of Bioluminescence Emitted by Recombinant Baculovirus-Infected Insect Cells），似乎在PE通道测，然后比较重要的是加入底物后快速上机，荧光变化时间比较短。

其实这一步我觉得可以借鉴钙离子内流的步骤，因为你用的机器是非加压上样，所以你先获取50ul未加底物的细胞，等获取的差不多了，加入底物振荡后卡上去，马上点击获取，从Time/PE图上看PE荧光随着Time的变化。

niwanmao

酶标仪你用的分别是什么激发光和发射光波长？是不是流式细胞仪未配备此类波长？

忞勣的FACS

niwanmao 发表于 2023-10-18 22:08
酶标仪你用的分别是什么激发光和发射光波长？是不是流式细胞仪未配备此类波长？ ...

酶标仪：Thermo Varioskan LUX，化学发光模块，没有用荧光模块；
流式仪：Agilent Novocyte Advanteon，配备了此类波长，见附图

忞勣的FACS

niwanmao 发表于 2023-10-19 09:50
从这篇1994年的文章看（Flow Cytometric Analysis of Bioluminescence Emitted by Recombinant Baculoviru ...

谢谢啦 如果这样的话 那我还是考虑用化学发光检测仪或者成像的方法检测吧