组织提取的细胞需要染死细胞吗

瓜瓜999

我是从心脏提取免疫细胞，之前staining用了Zombie，带我的博后说结果不好，之后就不用Zombie，Fc blocking之后直接染抗体。
请问大家staining时染死/活细胞是必须的吗？谢谢~

niwanmao

组织样本，很有必要做的

瓜瓜999

niwanmao 发表于 2023-10-30 16:57
组织样本，很有必要做的

请问老师有推荐关于这个方面的文献吗？博后不想染，但我担心影响之后的实验结果。我想找几篇文献和她讨论，非常感谢老师

瓜瓜999

niwanmao 发表于 2023-10-30 16:57
组织样本，很有必要做的

我们staining之后用了PFA，博后说反正都用PFA fixation，只是看有什么细胞。请问老师这样做出来的话会有什么影响吗，谢谢老师~

wxd

因为死细胞的自发荧光会很强烈，如果不用死活染料排除死细胞，可能会在分析结果的散点图中出现沿着对角线分布的细胞群，影响实验结果。所以对于组织，血液类样品，为了确保实验结果的准确，一般会加死活染料来排除死细胞。但这不是绝对的，比如血液样品，如果样品新鲜，并且只做少数几个细胞表面染色的多染，也可以不排除死细胞，但这个需要预实验确定样品中死细胞不多或者不会对结果造成干扰。
你可以看一下已经拿到的数据，对死细胞群体进行分析，看看这些细胞在荧光通道的分布以及对应的比例是不是和活细胞群体基本一致，如果一致，可以不做死活细胞染色，不一致的话，还是加上吧。
至于文献，你搜索你的领域的文献时加上全文搜索fixation或者PFA或者其他可能跟这个有关联的词就好了，很好找的。

瓜瓜999

wxd 发表于 2023-11-2 09:40
因为死细胞的自发荧光会很强烈，如果不用死活染料排除死细胞，可能会在分析结果的散点图中出现沿着对角线分 ...

非常感谢~~
还想再问一下您提到的“沿对角线分别的细胞群”，是指图片粉色框框那个吗（no viability dye)，谢谢~

viability dye

niwanmao

瓜瓜999 发表于 2023-11-3 05:08
非常感谢~~
还想再问一下您提到的“沿对角线分别的细胞群”，是指图片粉色框框那个吗（no viability dye) ...

粉框里面是排除死细胞前后的对比，左侧就是死细胞造成的非特异性染色，故出现这种无法解释的双染。

wxd说的对角线分布的细胞，是一些死细胞通常在很多通道的双参数图上，由于对各种染料均会出现非特异性染色，故易出现对角线分布

瓜瓜999

niwanmao 发表于 2023-11-3 07:41
粉框里面是排除死细胞前后的对比，左侧就是死细胞造成的非特异性染色，故出现这种无法解释的双染。

wxd ...

明白了~谢谢老师~