巨噬细胞系M1 M2分型占比

嘎嘎

请问各位老师，用RAW264.7诱导巨噬细胞分化M1,M2一般诱导出的M1和M2分别能占百分之多少呢？我标记了F480和CD206,CD80进行流式检测，用blank作为对照的话，M1和M2的阳性率可达到80%以上，是不是不太正常？

niwanmao

Blank做对照，不能反映巨噬细胞非特异结合Fc段的背景，故比例会很高。
而且如果你检测用的各个CD分子分群分不清的话，可能染色本身就有问题。

嘎嘎

谢谢倪老师回复，但我的样本管有加Fc阻断剂，我是不是应该用未刺激组做对照圈门呢？
而且我上次做的未刺激组和blank比阳性率也很高，能达到70%左右，M0期的CD206和CD80也会有这么高表达吗？
我做这几次CD206和CD80都没有明显分群，都是连续性表达的，这两个marker是应该有明显分群的？
我的染色步骤：6孔板细胞。CD206：2ul fc阻断剂 10min—清洗—F480（2.5ul）—清洗—固定剂 20min—清洗—fc 2ul —清洗—cd206（2.5ul）40min—清洗—重悬上机。
CD80：加fc 2ul 10min — F480 2.5ul+cd80 2ul 避光15min—清洗—重悬上机
麻烦老师您再看看染色大概可能是哪里出了问题呢？

niwanmao

嘎嘎 发表于 2023-11-12 12:15
谢谢倪老师回复，但我的样本管有加Fc阻断剂，我是不是应该用未刺激组做对照圈门呢？
而且我上次做的未刺激 ...

1、方案建议用CD80、HLA-DR、CD206、CD38，可以分别两两组合去分，容易分开
2、阻断剂后面的清洗这步去掉，不要洗； 固定剂不要加。全部表面染色
3、必须要多色染色，单染肯定分不开群

嘎嘎

niwanmao 发表于 2023-11-12 20:08
1、方案建议用CD80、HLA-DR、CD206、CD38，可以分别两两组合去分，容易分开
2、阻断剂后面的清洗这步去掉 ...

好的 谢谢倪老师，我们改进试一试。

yuen05xd

niwanmao 发表于 2023-11-12 20:08
1、方案建议用CD80、HLA-DR、CD206、CD38，可以分别两两组合去分，容易分开
2、阻断剂后面的清洗这步去掉 ...

老师，CD206不是要破膜染的吗

niwanmao

yuen05xd 发表于 2025-6-30 19:34
老师，CD206不是要破膜染的吗

我们在人样本里面试过表面染色，可以染

myy559

yuen05xd 发表于 2025-6-30 19:34
老师，CD206不是要破膜染的吗

这个得看抗体的结合位点吧。有的CD206抗体结合位点在膜内，有的在膜外。

2415152240

niwanmao 发表于 2025-6-30 20:28
我们在人样本里面试过表面染色，可以染

老师，我想请教一下，themo的CD206 (MMR) Antibody (25-2061-82) in Flow这个CD206可以表面染色吗，之前都是破膜染色的，听你一说尝试了一下表面染色，也能看见很多阳性，不确定这个阳性是不是真的。

niwanmao

2415152240 发表于 2025-7-25 09:14
老师，我想请教一下，themo的CD206 (MMR) Antibody (25-2061-82) in Flow这个CD206可以表面染色吗，之前 ...

这个抗体在官网的说明里面写得是要固定破膜染胞内的：
Applications Reported: This MR6F3 antibody has been reported for use in flow cytometric analysis, and intracellular staining followed by flow cytometric analysis.

Applications Tested: This MR6F3 antibody has been tested by intracellular staining and flow cytometric analysis of mouse resident peritoneal exudate cells using the Intracellular Fixation & Permeabilization Buffer Set (Product # 88-8824-00 and protocol. This can be used at less than or equal to 0.25 µg per test. A test is defined as the amount (µg) of antibody that will stain a cell sample in a final volume of 100 µL. Cell number should be determined empirically but can range from 10^5 to 10^8 cells/test. It is recommended that the antibody be carefully titrated for optimal performance in the assay of interest.