巨噬细胞系M1 M2分型占比

嘎嘎

请问各位老师，用RAW264.7诱导巨噬细胞分化M1,M2一般诱导出的M1和M2分别能占百分之多少呢？我标记了F480和CD206,CD80进行流式检测，用blank作为对照的话，M1和M2的阳性率可达到80%以上，是不是不太正常？

niwanmao

Blank做对照，不能反映巨噬细胞非特异结合Fc段的背景，故比例会很高。
而且如果你检测用的各个CD分子分群分不清的话，可能染色本身就有问题。

嘎嘎

谢谢倪老师回复，但我的样本管有加Fc阻断剂，我是不是应该用未刺激组做对照圈门呢？
而且我上次做的未刺激组和blank比阳性率也很高，能达到70%左右，M0期的CD206和CD80也会有这么高表达吗？
我做这几次CD206和CD80都没有明显分群，都是连续性表达的，这两个marker是应该有明显分群的？
我的染色步骤：6孔板细胞。CD206：2ul fc阻断剂 10min—清洗—F480（2.5ul）—清洗—固定剂 20min—清洗—fc 2ul —清洗—cd206（2.5ul）40min—清洗—重悬上机。
CD80：加fc 2ul 10min — F480 2.5ul+cd80 2ul 避光15min—清洗—重悬上机
麻烦老师您再看看染色大概可能是哪里出了问题呢？

niwanmao

嘎嘎 发表于 2023-11-12 12:15
谢谢倪老师回复，但我的样本管有加Fc阻断剂，我是不是应该用未刺激组做对照圈门呢？
而且我上次做的未刺激 ...

1、方案建议用CD80、HLA-DR、CD206、CD38，可以分别两两组合去分，容易分开
2、阻断剂后面的清洗这步去掉，不要洗； 固定剂不要加。全部表面染色
3、必须要多色染色，单染肯定分不开群

嘎嘎

niwanmao 发表于 2023-11-12 20:08
1、方案建议用CD80、HLA-DR、CD206、CD38，可以分别两两组合去分，容易分开
2、阻断剂后面的清洗这步去掉 ...

好的 谢谢倪老师，我们改进试一试。