混合淋巴细胞培养，CFSE测增殖，如何区分增殖子代和反应细胞

廿酸

本人流式新手，最近在做混合淋巴细胞培养，细胞来源为不同个体PBMC，反应细胞行CFSE染色，刺激细胞行丝裂霉素处理，文献认为丝裂霉素处理后，细胞暂不增殖但保留活性和抗原性。

孔板混合培养以上2种细胞。
FSC/SSC圈增殖门，FSC-H/FSC-A后，直接CFSE/SSC时，增殖子代和刺激细胞有部分重叠（R3），所以想区分二者看反应细胞真实增殖情况。

想尝试用PI染色，但考虑反应细胞只是未增殖，但未死亡。

一直没有找到合适的办法。想请问各位老师有没有什么方法，可以达到区分这两种细胞的目的。

wxd

流式细胞仪有405激光器的话，可以用DAPI或者H33342对刺激细胞染色。没有的话，可以用SYTO 63或者DRAQ5（这两个都用APC通道）对刺激细胞染色。
但是根据你的描述：这个反应体系中，刺激细胞没有进行染色，反应细胞进行CFSE染色，理论上CFSE/SSC坐标系中，刺激细胞和反应细胞应该分的很开才对，不知道为什么你的会离得特别近。建议你确认一下R3门左边的是不是刺激细胞，或者优化一下CFSE的染色浓度和时间。