淋巴结消化CD8表达消失

kloading

新鲜淋巴结提取后胶原酶4（1mg/ml），DNase1（0.2mg/ml）1640无血清培养基中消化30min，未裂红，上机检测发现CD8+T细胞群全部消失，求解原因

niwanmao

酶消化后，最怕的就是这个事情，消化时间很有讲究，既要解离成单细胞，又不能过。

建议做一次机械法（快速研磨15秒），试试

kloading

谢谢您，我尝试一下

H4nn1

对于脾脏和淋巴结组织都是在滤网上直接研磨来提取单个细胞就好了，除非像肿瘤组织，皮肤这种是酶解加机械力一起上

AAAAAjjj

我之前做淋巴结都是直接在细胞滤器上用注射器橡胶塞那头去研磨，细胞活性很好，有组织碎块就过滤两次

zdvfsadb

淋巴结处理我是用40um滤网研磨后离心、重悬，然后标准流程做完，没遇到过细胞活性问题。不过淋巴结周边组织不要取太多，不然在设门的前几张图会不那么好看。

Jeffery_9

zdvfsadb 发表于 2024-1-4 14:29
淋巴结处理我是用40um滤网研磨后离心、重悬，然后标准流程做完，没遇到过细胞活性问题。不过淋巴结周边组织 ...

请问为什么会出现磨完 离心后 细胞特别少的情况

zdvfsadb

Jeffery_9 发表于 2024-5-6 13:54
请问为什么会出现磨完 离心后 细胞特别少的情况

有几种可能，要么淋巴结提取的数量不够，比如提了很多脂肪组织，可以多取几个淋巴结，要么是研磨的时候太过用力，细胞死亡太多，可以研磨一会PBS冲洗一下，然后继续研磨，直至装满50ml falcon，要么是离心速度不够，细胞丢失，我组织提取研磨后第一遍离心会用到700g，不怎么影响细胞活性，后续都是500g，你可以再改良一下条件看看

zdvfsadb

Jeffery_9 发表于 2024-5-6 13:54
请问为什么会出现磨完 离心后 细胞特别少的情况

还有就是，淋巴结不消化也没问题的，我都直接研磨+PBS，消化理论上也会导致细胞损失

Jeffery_9

zdvfsadb 发表于 2024-5-6 17:15
有几种可能，要么淋巴结提取的数量不够，比如提了很多脂肪组织，可以多取几个淋巴结，要么是研磨的时候太 ...

我一般是取腹股沟加腘窝一共四颗一起磨，可能是我太用力了？ 我今天再试试加大一点离心速度