modfitl软件原理

无知的牧羊人

基于modifit 想问一下几个问题
1.PI值是根据流式数据中哪些数据进行计算的？
2.对于相同样本，在两台不同品牌的流式仪上检测出得到的FCS文件，在modifit分析中 淋巴细胞增殖抑制，NEG组的父群（parent）是有不同的（一个217一个168左右），请问一下这个是由于仪器本身算法的问题导致的么？
3.有没有老师有有关modifit仪器工作原理的资料。
4.在使用modifit分析时，发现，parent设置的越小会导致后续分析出的阳性组数值也越小，请问这块是什么原理呢？
5.问个关于增殖抑制中CFSE检测的问题，实验中CFSE浓度都一致，在不同时间检测同一批PBMC细胞的CFSE，为什么有的实验中CFSE的荧光强度是某几次实验的2倍。CFSE实验中他的中位荧光强度跟培养会有关系么？

niwanmao

Modfit是软件，不是仪器

其原理是根据峰形分布，进行拟合

wxd

如果你说的PI值指的时PI的荧光强度的话，它是带有PI的细胞经过流动室被激光激发，所发出的荧光被光电倍增管转化为电信号并放大产生的一个表征荧光强度的数值。同一个样品在不同的流式细胞仪中因为有不同的换算方法会产生不同的数值，在同一台仪器的不同电压下，同样的荧光强度也会产生不同的数值。因此比较两台不同的流式细胞仪产生的荧光强度数值没有意义，除非同时还用校准微球做了校准。
modfit的基本工作原理是：提前设置G0/G1峰、S期峰（平顶）、G2/M期峰（即软件建立理想细胞周期模型），调整这三个峰在PI通道的位置、高度、宽度等参数，将这三个峰跟要分析的数据峰尽可能重叠（数据拟合）。统计这三个峰所覆盖的原始数据峰各通道细胞所占总细胞的比例，从而得到各个分裂时期的细胞比例。实际使用中，软件除了计算细胞周期各期细胞比例，还会计算G2/G1的值，CV%，RCS，碎片率等信息。
CFSE检测增殖，是利用CFSE可以在细胞内无毒且稳定存在的特性，随着细胞分裂，CFSE会被平均分配到两个子代细胞中，每个细胞的荧光强度减半。所以CFSE增殖实验一般是看CFSE通道峰的数量，很少看亲本的荧光强度。至于你说的有的实验中CFSE的荧光强度是某几次实验的2倍，在肿瘤细胞中是有可能出现的，但是理论上PBMC不会出现初代细胞全部消失的，所以这个现象可能跟仪器稳定性有关。理论上，CFSE实验的中位荧光强度会随着培养时间的延长而降低。