关于流式样品的重复问题

hydwl2019

我现在5组小鼠，每组6只，测流式的话30只都要测吗，每组最少可以是几只，还有测的时候同一管需要重复测几次吗？

niwanmao

染色效果良好的话，不需要重复

wxd

从统计学上来讲，一般每个组别最少测3只，文献中一般5-6只。但根据你的描述，你大概没有相应的动物实验经验，对实验结果没有把握，建议30只都检测了，增加n的数量，便于统计学分析。同样的道理，流式染色上机你应该也是第一次做，建议每个检测管测三次。
其实在开展正式动物实验之前，你应该先开展一个预实验，设置对照组和阳性对照组，每组一到两只，用于练手、熟悉实验流程、对实验结果有大概的预期，这样开展正式实验就更有把握一些。

hydwl2019

wxd 发表于 2024-1-15 09:17
从统计学上来讲，一般每个组别最少测3只，文献中一般5-6只。但根据你的描述，你大概没有相应的动物实验经验 ...

感谢，我要测脾脏细胞的一些免疫学指标，但是指标太多了，有treg，breg还有DC成熟标志物，30只一共120管，再测3次的话就360次了，我可以把细胞固定之后再慢慢测吗

vtea

hydwl2019 发表于 2024-1-15 09:47
感谢，我要测脾脏细胞的一些免疫学指标，但是指标太多了，有treg，breg还有DC成熟标志物，30只一共120管 ...

在不影响实验结果的情况下，建议不要一下子把30只小鼠都处理了，分批处理，操作会花很多时间，可能会影响实验，因为你要测的一些指标可能要收很多细胞分析才比较可靠。染色好了固定完可以放置一段时间，过夜基本没问题，胞内染色你甚至可以选择过夜染色。我的经验：4℃过夜抗原表达比例应该没多大问题，对绝对计数有影响。

hydwl2019

vtea 发表于 2024-1-15 09:58
在不影响实验结果的情况下，建议不要一下子把30只小鼠都处理了，分批处理，操作会花很多时间，可能会影响 ...

先染色再固定，还是固定之后再染色，这两种哪个好一点

wxd

可以第一天每组处理一只，一共六只小鼠，作为预实验。第二天每组处理两只，一共十二只。这样每天的工作量不大，第二天就可以对实验结果有大致的了解。也不会因为不熟悉等原因毁掉整个实验。剩下的每组三只看情况，或者按照原计划进行，或者修改实验方案。一天能处理完的话，就处理完，处理不完的话，分成两天，结合楼上[at]vtea[/at]的建议，应该没太大问题。动物实验一般周期都不短，早一天晚一天没有太大影响。况且楼主的工作量确实大，一天时间真的完不成。

vtea

hydwl2019 发表于 2024-1-15 10:19
先染色再固定，还是固定之后再染色，这两种哪个好一点

你看一下要染色的标记，有些固定后可能会染不出来

zdvfsadb

我一般一次实验造模3只小鼠，每组安排2-3次实验，最终样本是一共每组6只，这样既有实验的生物学重复（n>=2），又保证了统计比较的意义（6只小鼠比6只小鼠），如果你能算出来样本量那就按照算的样本量去安排实验的次数