小鼠外周血上机总细胞FSC SSC电压门控设置调节

天空的一片彩云

各位老师好，请问下面用BD流式仪上机收集的小鼠尾静脉血外周血总细胞(FSC SSC)圈门电压门控哪里出现了问题，该怎样解决才能得到比较合理的正常图呢？

                               
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niwanmao

能否描述一下你的真实实验过程？尤其是裂解液成份、离心速度等

我是超人我怕啥

有没有可能是图1上边压线的和图二左下角的是目的细胞

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niwanmao 发表于 2024-2-23 14:33
能否描述一下你的真实实验过程？尤其是裂解液成份、离心速度等

谢谢老师，我的裂解液使用的是实验室自行配置的ACK(含氯化铵、碳酸氢钾、0.5MEDTA 2Na)，离心速度是1500rpm。图1是第二次上机检测从小鼠尾静脉采集的外周血，图2是第一次上机检测的，两次上机FSC和SSC通道的电压一致，不过图1是我自己不太会调节电压，图2是上机管理员师姐当时帮忙调整的。老师现在看来图1是否是FSC电压需要上调呀，因为好多散点压在了左边界限上。

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我是超人我怕啥 发表于 2024-2-23 14:43
有没有可能是图1上边压线的和图二左下角的是目的细胞

谢谢解答，我这个实验的主要目的是检测外周血中B细胞、T细胞的占比。图2是第一次实验上机，FSC SSC电压调节应该是合适的，但图1是第二次实验上机，可能连FSC SSC电压都没调整好，主要是自己上机的时候不太会调节，但这个外周血总细胞好像和其他人的长的不一样，不清楚是不是采血量的原因。

niwanmao

天空的一片彩云 发表于 2024-2-23 15:57
谢谢老师，我的裂解液使用的是实验室自行配置的ACK(含氯化铵、碳酸氢钾、0.5MEDTA 2Na)，离心速度是1500r ...

我的建议是：
1、裂解后，等待样本变澄清，取一滴在镜下观察细胞形态，确认裂解液效果且对有核细胞无损伤
2、上机时，标记CD3等标记，确认淋巴细胞群体所在位置无误

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niwanmao 发表于 2024-2-24 17:02
我的建议是：
1、裂解后，等待样本变澄清，取一滴在镜下观察细胞形态，确认裂解液效果且对有核细胞无损伤 ...

好的，谢谢老师！我之后去试试！