凋亡检测同一个细胞系的不同干预，第二次结果不分群

123tzc

凋亡检测同一个细胞系，使用两种不同的方法干预细胞，均采用第一次检测的单染管和空白管调补偿，第一次分析后分群，第二次分析后不分群，想请教各位老师，第二次不分群的原因是什么呢？是因为未使用第二次的的单染管和空白管调补偿嘛？第二次的结果还可以用吗？
第一次的结果


第二次的结果



选取结果均采用同种处理方式处理，但第一次处理时间为48h，第二次为30h

流式小白请求各位老师的帮助，谢谢！！！

niwanmao

空白管是调节电压，单染管调节补偿

通常，如果电压确定是一致，是不应该出现如此之大的差异，除非第二次分方法对细胞的颗粒度影响很大

因为不知道你的研究目的是什么，所以不能帮你确定第二次是否能用

123tzc

niwanmao 发表于 2024-2-27 14:33
空白管是调节电压，单染管调节补偿

通常，如果电压确定是一致，是不应该出现如此之大的差异，除非第二次分 ...

谢谢倪老师的回复，我用siRNA转染细胞，抑制相关基因的表达，24~72h内送去流式，研究目的需要分别分析此干预的早期凋亡和晚期凋亡的比例的显著性，以验证这个基因是否对此细胞系的癌变有无促进作用，

niwanmao

123tzc 发表于 2024-2-27 16:56
谢谢倪老师的回复，我用siRNA转染细胞，抑制相关基因的表达，24~72h内送去流式，研究目的需要分别分析此 ...

第二次的结果，是干预24小时和72小时的结果吗？

wxd

建议你放一下对照组（正常培养，但是和实验组一样进行染色）的检测结果。以便我们排除细胞状态、试剂盒等方面的影响。

123tzc

niwanmao 发表于 2024-2-27 16:59
第二次的结果，是干预24小时和72小时的结果吗？

不是的老师，一次内的结果是一致的，第一次是干预了48h，第二次是干预30h

123tzc

wxd 发表于 2024-2-27 17:12
建议你放一下对照组（正常培养，但是和实验组一样进行染色）的检测结果。以便我们排除细胞状态、试剂盒等方 ...

谢谢老师非常细致的建议！我将两次对照组和实验组的结果都放在了首楼，麻烦老师啦

niwanmao

123tzc 发表于 2024-2-27 17:45
不是的老师，一次内的结果是一致的，第一次是干预了48h，第二次是干预30h ...

如果电压确认没改变，第二次的图形似乎是处理时出了啥未知的问题。最好再重复几次吧

wxd

如果楼主能确认两次实验细胞状态都没问题的话，从两次检测结果来看，原因可能是试剂盒不稳定或者两次处理时间不同。
试剂盒的原因更大一些，可以换个试剂盒试试或者不换试剂盒，换一批细胞重复第一次试验的对照组，看结果会不会重现。
如果排除了试剂盒的原因，建议重复第二次实验看看结果能不能重现，如果可以重现，结果就是可用的。