奇怪的流式图：细胞周围很多乱飞的杂点

Evangeline111 · 发表于 2024-5-18 21:03:32

各位老师们好！本人是一名学习免疫学的研究生，既往流式结果中偶尔会遇到杂点，但一般都不多；这是我用stem cell 分选CD4+CD25+细胞和另外一种带GFP荧光的细胞共培养，参考文献的方法加了T activator CD3/28 beads, 收细胞时过了一遍磁力分选架，想请教各位老师们:
1.下图中突然出现很多乱飞的杂点考虑什么原因呢？个人怀疑是分选试剂中CD25-PE是阳性选择所带的颗粒可能没有去除，或者是T activator CD3/28 beads没有去干净，
2.我手动调补偿时需要考虑这些点吗？

niwanmao · 发表于 2024-5-19 14:15:21

需要看你使用了什么方案？再看FCS文件各通道之间的补偿。目前估计可能是某个通道的补偿过度

Smile14 · 发表于 2024-5-22 16:03:59

beads没去干净的话应该可以用Fsc/SSc的图看出来一些，目前这张图就感觉补偿有点过，你要不先用fsc/ssc排除一下beads选中目标细胞群

苏沁沁 · 发表于 2024-5-24 15:38:19

需要看一下单染补偿图

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[标本处理] 奇怪的流式图：细胞周围很多乱飞的杂点