关于小鼠脑和脊髓流式细胞术分析

科研废物

各位老师好，我目前的课题涉及到小鼠脑和脊髓的免疫细胞分型，有几个简单的问题不是很清楚，希望得到各位老师的指点：

1、通过酶解和percoll分离，一只小鼠的大脑能获得大概0.6-0.8million的免疫细胞，请问一下这个细胞比例算是正常的吗？
2、我想看一下脑中细胞因子的分泌水平，可以用流式的方法检测吗（PMA+Ionomycin）？我查阅文献发现有人是用ELISA进行检测的

niwanmao

1、根据现有数据，使用酶解和 percoll 分离法从小鼠大脑中分离出的免疫细胞产量约为 0.6-0.8 Million个细胞，是合理的。 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3339837/  这项研究表明，通常能从每只小鼠大脑中获得约 3~5×10E5 个细胞。

2、虽然酶联免疫吸附试验（ELISA）也是检测细胞因子的常用方法，并因其灵敏度和定量能力而被广泛使用，但检测的细胞上清已分泌的细胞因子。流式除了可通过CBA技术同样检测细胞上清的细胞因子，也可通过PMA+离子霉素刺激细胞，分析某个亚群的胞内因子分泌情况。从你的实验设计看，应该是要检测胞内因子吧，这样的话ELISA其实是不适用的。

科研废物

niwanmao 发表于 2024-7-4 16:39
1、根据现有数据，使用酶解和 percoll 分离法从小鼠大脑中分离出的免疫细胞产量约为 0.6-0.8 Million个细胞 ...

所以不能一次性把实验结果都拿到吧因为细胞量不够，做一次胞内检测至少也需要1M个细胞吧

niwanmao

科研废物 发表于 2024-7-4 18:31
所以不能一次性把实验结果都拿到吧因为细胞量不够，做一次胞内检测至少也需要1M个细胞吧 ...

主要看你要分析的群体少不少，如果绝大部分是你的目的细胞，那么几万个也能做做看。

麦小光

做流式其实够了，但是做ELISA很可能不够，因为ELISA的检测限问题，需要足够量的细胞，通常是10e5一个样本，并且通常你需要测副孔和多个细胞因子，基本上是不够的，像这种情况，要么直接上多因子检测，小样本量就可以测很多指标，要么全套流式，多色方案，一套实验可以 测完所有细胞因子

科研废物

麦小光 发表于 2024-7-5 17:12
做流式其实够了，但是做ELISA很可能不够，因为ELISA的检测限问题，需要足够量的细胞，通常是10e5一个样本， ...

明白了，谢谢！