光谱流式参考光谱建立

Veblen

请问大家，光谱流式建立参考标准光谱时，全染样本需要固定破膜。

我的问题是：对于单染表染的样本，是否可以不像全染样本一样去固定破膜？（因为我单染仅仅为了得到参考光谱，固定破膜后甚至影响抗体与抗原的结果，导致参考光谱反而不标准）
我这样理解对吗？
所以，表染marker建立参考光谱无需固定破膜？
请问一下大家，我这样理解正确吗？

wxd

不能这么理解。因为固定破膜不仅会影响抗体与抗原的结合，还会影响细胞本身的光谱特征。如果单染表染的样品和其他样品细胞的光谱特征不一致，对结果的影响更大。另外，如果所有样品都按照同样的方法固定破膜，则固定破膜对抗原抗体结合的影响可以忽略。所以，所有样品都需要按照同样的方式固定破膜。

facetodog

差异较大且数量较少的标记可能影响不大，可以直接调用。越复杂的抗体方案，越需要单独记录统一条件处理下的细胞光谱，同时也需要有FMO，这和传统流式的方式应该差不多。

Veblen

facetodog 发表于 2024-7-5 13:21
差异较大且数量较少的标记可能影响不大，可以直接调用。越复杂的抗体方案，越需要单独记录统一条件处理下的 ...

请问差异大且数量较少怎么理解呢？ 我认为既然数量这么少了，是不是更不应该固定破膜，影响抗体结合。

Veblen

wxd 发表于 2024-7-4 17:30
不能这么理解。因为固定破膜不仅会影响抗体与抗原的结合，还会影响细胞本身的光谱特征。如果单染表染的样品 ...

前半句十分认同，既然固定破膜对抗体和抗原的结合有所影响，就算所有样本都按同样方法固定破膜，但是对各个抗原的影响也应该是不一样的吧。前面谈到影响细胞本身光谱特征我觉得非常有道理。

Yuck

对照选择我觉得有个接受过程，如果你能完整的证明光谱单染比破膜单染更好，应该也可以被接受。目前都是完全一样操作的对照，最起码能人为排除的破膜因素排除掉了。如果证明非破膜单染比破膜更稳定、更强、更宽的标准光谱便于解析，觉得可以被接受。

facetodog

Veblen 发表于 2024-7-6 23:06
请问差异大且数量较少怎么理解呢？ 我认为既然数量这么少了，是不是更不应该固定破膜，影响抗体结合。 ...

抱歉漏了主语，是荧光光谱和荧光数量

Veblen

Yuck 发表于 2024-7-8 08:05
对照选择我觉得有个接受过程，如果你能完整的证明光谱单染比破膜单染更好，应该也可以被接受。目前都是完全 ...

好的，感谢