HLA-DR-ECD 新VS老产品测试全血差异较大

落叶风吹

背景：
试剂：HLA-DR_ECD两个不同批号的产品（下为A组和B组）（抗体交联物两个不同批号）

HLA-DR-ECD产品信息
Type	Conjugate_lot	Conjugate Manufacture  Date
A组(Test)	20011	12/13/2023
B组(Ref)	20010	8/16/2022

血样：健康人全血（EDTA抗凝）

测试方法：CD3_PB+HLA-DR_ECD 复染
问题描述：A组和B组的在淋巴细胞群中阳性细胞百分比差异较大（Total Delta%=9.51%)
B组结果如下：


A组结果如下：


(1)CD3-/HLA-DR+
Test-Ref=35.1%-31.12%=3.98%
(2)CD3+/HLA-DR+
Test-Ref=51.84%-46.31%=5.53%
Total：3.98%+5.53%=9.51%

厂家给的回复如下：

As for your issue, this is due to abrightness difference between the conjugate used for your Ref and the one used for your Test.

Since the HLA-DR staining is not a clearpositive population but a smear population on lymphocyte, having a brighterconjugate leaves to detection of more positive cells.

经验不足，针对厂家给的回复结果没办法判断是否正确，之前猜测是可能是原料批间差异没有控制好导致的。

希望老师们能帮忙答疑解惑，谢谢。

niwanmao

这个CV还行的，A组的试剂可以再进行抗体滴定，可把CV控制在10％以内了

落叶风吹

倪老师，厂家声称试剂不需要做滴定，他们出厂前已经是滴定到最优浓度了。
而且厂家内控要求是A组 VS B组的阳性细胞比值差异在5%以内，现在已经飙到9.51%了。

厂家回复说亮一点的复合物会影响产品的特异性？是否可靠？

niwanmao

落叶风吹 发表于 2024-7-10 14:41
倪老师，厂家声称试剂不需要做滴定，他们出厂前已经是滴定到最优浓度了。
而且厂家内控要求是A组 VS B组的 ...

要么你试一下，同一管染好色的样本，重复采集5次，看看这样重复获取的数据之间，CV怎么样？

如果这样的数据CV都大的话，可能得考虑机器问题了。

Yuck

有的指标CV20%都可接受。这个估计需要真正做方法学验证看结果来评判了

落叶风吹

niwanmao 发表于 2024-7-10 15:15
要么你试一下，同一管染好色的样本，重复采集5次，看看这样重复获取的数据之间，CV怎么样？

如果这样的 ...

好的，倪老师。

另外还有个信息，厂家在Ab纯化过程总，优化了脱盐工艺，HLA-DR在淋巴群中阴阳性分的就不是很清晰，拖带比较严重，脱盐工艺优化是不是也可能会提高特异性。

落叶风吹

Yuck 发表于 2024-7-11 09:28
有的指标CV20%都可接受。这个估计需要真正做方法学验证看结果来评判了

您说的这个指标是试剂的批内/间CV还是仪器的CV？
国内流式细胞试剂出厂标准是有行标要求的。没有超过15%的，仪器的CV比试剂更低。
参考：YY/T 1184-2010

niwanmao

落叶风吹 发表于 2024-7-11 13:06
好的，倪老师。

另外还有个信息，厂家在Ab纯化过程总，优化了脱盐工艺，HLA-DR在淋巴群中阴阳性分的就不 ...

肉眼看似乎差异不太明显。脱盐工艺我不太了解，咋优化了反而拖带吗？

Yuck

落叶风吹 发表于 2024-7-11 13:12
您说的这个指标是试剂的批内/间CV还是仪器的CV？
国内流式细胞试剂出厂标准是有行标要求的。没有超过15% ...

指具体实验。试剂出厂测试不代表最终应用不是。